[發明專利]前原條和中內胚層細胞

有效

• 申請號: 201210020574.6
• 申請日: 2005-07-08
• 公開（公告）號: CN102586170B
• 公開（公告）日: 2019-11-29
• 發明（設計）人: 凱文·艾倫·達穆爾;艾倫·D·阿古尼克;蘇珊·埃利澤;依文特·克魯恩;伊曼紐爾·E·貝特格
• 申請（專利權）人: 維亞希特公司
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12N5/071;C12Q1/6888;C12Q1/02;G01N33/68
• 代理公司: 11204 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 王達佐;洪欣<國際申請>=<國際公布>=

1.細胞培養物，包含：

包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培養基，

第一體外細胞群，其包含表達選自OCT4、SOX17、CXCR4、FOXA2、SOX7和SOX1的標志物的細胞，其中所述第一體外細胞群選自H7和H9；以及

第二細胞群，其包含第一體外細胞群的后代細胞，其中該后代細胞選自中內胚層細胞和前原條細胞，其中所述中內胚層細胞表達brachyury、FGF4或SNAI1，以及所述前原條細胞表達FGF8或核定位的β-連接素，其中所述第二細胞群包含至少5％的所述后代細胞，

其中通過使用人胚胎獲得的人細胞被排除在外，

其中所述中內胚層細胞通過在所述培養基中培養第一體外細胞群12至48小時獲得；所述前原條細胞通過在所述培養基中培養第一體外細胞群6至24小時獲得，以及

其中所述中內胚層細胞是能分化為中胚層細胞或定形內胚層細胞的專能細胞；所述前原條細胞是能分化為中內胚層細胞的專能細胞。

2.根據權利要求1的細胞培養物，其中，所述第二細胞群包含至少90％的所述后代細胞。

3.根據權利要求1的細胞培養物，其中，所述brachyury、FGF4或SNAI1的表達高于OCT4、SOX17、CXCR4、FOXA2、SOX7或SOX1的表達。

4.根據權利要求1的細胞培養物，其中，所述FGF8或核定位的β-連接素的表達高于brachyury、FGF4、SNAI1、SOX17、FOXA2、SOX7或SOX1的表達。

5.根據權利要求1的細胞培養物，其中，所述第二細胞群不含選自內臟內胚層細胞、體壁內胚層細胞、原始內胚層細胞、定形內胚層細胞、外胚層細胞和中胚層細胞的細胞。

6.一種細胞培養物，其包含：

包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培養基，和

選自中內胚層細胞和前原條細胞的細胞，其中所述細胞來源于選自H7和H9的細胞，其中所述中內胚層細胞表達brachyury、FGF4或SNAI1，以及所述前原條細胞表達FGF8或核定位的β-連接素；

其中所述中內胚層細胞通過在所述培養基中培養H7或H9細胞12至48小時獲得；以及所述前原條細胞通過在所述培養基中培養H7或H9細胞6至24小時獲得，和

其中所述中內胚層細胞是能分化為中胚層細胞或定形內胚層細胞的專能細胞；以及所述前原條細胞是能分化為中內胚層細胞的專能細胞。

7.一種體外細胞群，其包含中內胚層細胞，所述中內胚層細胞是能分化為中胚層細胞或定形內胚層細胞的專能細胞，其中所述中內胚層細胞來源于選自H7和H9的細胞，以及所述中內胚層細胞表達brachyury、FGF4或SNAI1，其中所述中內胚層細胞通過在包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培養基中培養H7或H9細胞12至48小時獲得。

8.根據權利要求7的體外細胞群，其中，所述體外細胞群包含至少95％的中內胚層細胞。

9.一種體外細胞群，其包含前原條細胞，所述前原條細胞是能分化為中內胚層細胞的專能細胞，其中所述前原條細胞來源于選自H7和H9的細胞，以及所述前原條細胞表達FGF8或核定位的β-連接素，其中所述前原條細胞通過在包含少于2％(v/v)血清和100ng/ml活化素A的培養基中培養養H7或H9細胞6至24小時獲得。

10.根據權利要求9的體外細胞群，其中，所述體外細胞群包含至少95％的前原條細胞。