[發(fā)明專利]對蝦白斑綜合癥病毒的雞胚培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210018771.4
• 申請日: 2012-01-20
• 公開（公告）號: CN102787099A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李登峰;劉聯(lián)國;彭嬌;陳炯;周永強(qiáng);顧曉英
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

1.一種對蝦白斑綜合癥病毒的雞胚培養(yǎng)方法，其特征在于：采用SPF雞胚作為對蝦白斑綜合癥病毒的體外培養(yǎng)體系，選擇預(yù)先培養(yǎng)了6-7天的健康雞胚，將預(yù)先制備除菌了的對蝦白斑綜合癥病毒接種液接種至雞胚尿囊膜上，收集培養(yǎng)時(shí)間為5-10天的死亡雞胚進(jìn)行勻漿離心分離，得到含對蝦白斑綜合癥病毒的上清液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對蝦白斑綜合癥病毒的雞胚培養(yǎng)方法，其特征在于具體的操作步驟如下：

（1）選取符合SPF規(guī)格的新鮮種蛋，氣室向上38℃孵化，相對濕度50%，每4小時(shí)翻蛋一次，培養(yǎng)6-7天后，選取血管粗大且呈鮮紅色的健康發(fā)育良好的雞胚在暗室內(nèi)畫出氣室邊緣并標(biāo)明大血管所處位置，以備病毒接種用；

（2）選取患白斑綜合癥的日本對蝦若干只，取甲殼和內(nèi)臟，按質(zhì)量體積比1g：10ml的比例將甲殼和內(nèi)臟加入到PH為7.4的0.1?M的PBS緩沖液，于勻漿器中勻漿，將勻漿液于4℃，6000g離心20min后，取含病毒的上清液，將離心所得的沉淀用1～2ml的0.1M的PBS重懸，再次勻漿，將再次勻漿得到的勻漿液于4℃，6000g，離心20min，合并兩次離心所得的上清液，將合并所得上清液先用0.45μm的濾膜抽濾除去組織碎片，再用0.22μm的濾膜抽濾除菌，除菌后的上清液每毫升加入1000單位青霉素和1000ug鏈霉素后，于4℃冰浴過夜處理，即得到對蝦白斑綜合癥病毒接種液；

（3）選取健康，發(fā)育良好的6-7日齡的雞胚，將對蝦白斑綜合癥病毒接種液按接種量0.15-0.2ml接種到雞胚的尿囊膜上，將已接種了病毒的雞胚于33℃的恒溫條件下培養(yǎng)13-14天，收集培養(yǎng)時(shí)間為5-10天的死亡雞胚；

（4）將步驟（3）得到的死亡雞胚分離出尿囊膜與尿囊液，按質(zhì)量體積比1g：10ml的比例將尿囊膜與尿囊液的混合物加入到PH為7.4的0.1?M的PBS緩沖液，重復(fù)步驟（2）即得到含對蝦白斑綜合癥病毒的上清液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的對蝦白斑綜合癥病毒的雞胚培養(yǎng)方法，其特征在于：步驟（2）中采用的PBS緩沖液配制方法是：8g?NaCl，0.2gKCl，3.62g?Na₂PO₄??12H₂O，0.24g?KH₂PO₄，加入800ml雙蒸水完全溶解，調(diào)節(jié)PH至7.4，加入雙蒸水定容至1000ml，高壓滅菌。