[發明專利]一種甲魚系統性敗血癥球狀病毒滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201210018723.5
• 申請日: 2012-01-20
• 公開（公告）號: CN102626514A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 李登峰;周永強;劉聯國;彭嬌
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K9/107;A61P31/12;C12N7/02;C12N7/06
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

1.一種甲魚系統性敗血癥球狀病毒滅活疫苗，其特征在于：本疫苗含有保藏號為CGMCC?No.5378的經滅活的甲魚系統性敗血癥球狀病毒。

2.一種根據權利要求1所述的甲魚系統性敗血癥球狀病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）病毒純化

取患系統性敗血癥的甲魚，將發病甲魚內臟組織剪碎，按質量體積比1g：10ml比例將甲魚內臟加入到TNE緩沖液中，于4℃下，8000r/min離心20min后，取上清液于4℃下，35000g離心1h；然后取底部核心部位白色沉淀，重懸于5mlTNE緩沖液中，4℃冰箱冰浴過夜，將過夜的沉淀輕輕吹打均勻，于4℃下，8000r/min離心20min，取上清液于4℃下，35000g離心1h，得到的白色沉淀即為純化病毒；

（2）抗原滅活

將步驟（1）得到的純化病毒用0.9%無菌生理鹽水稀釋到病毒蛋白終濃度0.5-1mg/ml，然后加入終體積0.5%的福爾馬林于37℃恒溫水浴鍋滅活24h，每2-3h進行振蕩混勻，得到無菌的滅活病毒；

（3）乳化

將步驟（2）得到的滅活病毒與弗式完全佐劑按體積比1：1混合后，于4℃間歇振蕩乳化6-8h得到甲魚系統性敗血癥球狀病毒滅活疫苗。

3.根據權利要求2所述的一種甲魚系統性敗血癥球狀病毒滅活疫苗的制備方法，其特征在于：所述的TNE緩沖液配制方法：Tris?3.0289g、NaCl?6.00g、EDTA?0.9306g?補足雙蒸水至500ml，調整pH?7.6，高壓滅菌，4℃冷藏備用。