[發明專利]具有高親和力的AEG-1/1E3單克隆抗體

有效

• 申請號: 201210017457.4
• 申請日: 2012-01-19
• 公開（公告）號: CN102585004A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張惠中;董軻;龍敏;陳曦
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C07K16/32
• 分類號: C07K16/32;C12N15/13;C12N15/63;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及一種單克隆抗體，特別涉及具有高親和力的AEG-1/1E3單克隆抗體，包括其氨基酸序列和核苷酸序列。

背景技術

伴隨人類基因組測序完成，我們更清醒地意識到，針對人類基因組中的三萬多個功能基因，我們僅僅了解了極少數基因的基本功能和作用，而更多的、未知的新基因及其所編碼蛋白所發揮的生理、病理作用仍有待人們深入發掘和探索，尤其是與惡性腫瘤發生、發展密切相關的各種新基因及其功能逐步被認識和闡明。星形膠質細胞上調基因1(AEG-1)，是一個新發現的、調控多種腫瘤細胞生物學表型的重要癌基因。自2002年發現并克隆此基因以來，該基因在惡性腫瘤發生、發展中的多重功能作用已經成為惡性腫瘤研究領域備受關注的熱點之一。它通過調控NF-KB、PI3k/Akt、P44/42-ERK、P38-MAPK及Wnt等多種信號轉導通路在腫瘤的發生、發展、轉移、預后、耐藥等各方面發揮重要的作用。Khuda等人報道，人的單核前體細胞受到LPS刺激并誘導AEG-1的上調是由NF-kB活性上調造成。但另一方面，AEG-1本身又可激活NF-kB表達，而且抑制AEG-1可以阻斷LPS誘導的炎性細胞因子的產生，如TNF-a，PGE2等。這些發現提示AEG-1在細菌感染后發揮的免疫學作用可能與腫瘤炎性作用中的某些關鍵環節有關。此外，AEG-1目前研究的熱點之一是關于其不同定位與功能之間的關系。研究報道，在乳腺癌、肝癌和黑色素瘤中AEG-1核轉位預示預后不良，而在前列腺癌中，核染色的消失同時胞漿染色增強則提示疾病的進展。

AEG-1可變區抗體在上述問題的研究中是必不可少的工具，然而，目前國內外未見抗AEG-1可變區抗體制備的研究報道，這給AEG-1的深入研究帶來諸多不便。此外，早期診斷、抗體治療在疾病尤其是腫瘤性疾病中的應用也越來越受到研究者的關注。

Porter等對血清抗體的研究證明，免疫球蛋白分子的基本結構是由四條肽鏈組成，即由二條相同的分子量較小的肽鏈稱輕鏈(L鏈)和二條相同的分子量較大的肽鏈稱為重鏈(H鏈)組成的。輕鏈與重鏈以二硫鍵相連接而形成一個四肽鏈分子稱為免疫球蛋白分子單體，是構成免疫球蛋白分子的基本結構。免疫球蛋白單體中四條肽鏈兩端游離的氨基或羧基的方向是一致的，分別命名為氨基端(N端)和羧基端(C端)，靠近N端的可變區(V區)由高變區/互補決定區(HVR/CDR)和骨架區(FWR)組成；靠近C端為恒定區(C區)。重鏈可變區和輕鏈可變區折疊成相對獨立的結構域，由一條親水性的連接肽相連，從而形成和天然抗體中抗原結合位點相似的結構。重鏈可變區和輕鏈可變區的可變性是相對于輕鏈和重鏈的恒定區而言的，它們的氨基酸變化頻率在不同的抗體中比較大，但就輕鏈或重鏈的可變區本身而言，它們的氨基酸變化率在不同的位置有明顯的不同。對可變區的序列比較后發現，有的區域比較保守，在不同的抗體中大致相似，稱它們為框架區。輕鏈和重鏈中都有四個框架區：FWR1，FWR2，FWR3和FWR4。另外一些區域，它們的變化率在不同的抗體中比較大，稱它們為超變區，又因為它們與抗體的特異性有關，即與抗原相匹配，因而人們稱它們為互補決定區(Complementary?Determined?Region，CDR)。輕鏈和重鏈都有三個超變區：CDR1，CDR2，CDR3。免疫球蛋白單體中恒定區(C區)可引發抗原抗體識別后的反應，抗體根據FWR/C區不同可分為人源、鼠源等，鼠源性抗體在人體內使用時具有免疫原性，易引起人體的免疫反應，這些免疫反應可引起宿主對鼠源性抗體的清除以及免疫復合物介導的超敏反應。

AEG-1在腫瘤的治療、診斷以及預后判斷中，均具有較為廣闊的應用前景，為了更好地研究AEG-1在惡性腫瘤中的信號轉導通路，以及為惡性腫瘤的診斷、生物治療奠定物質基礎，我們首先必須獲得具有良好特異性、親和力和中和活性的鼠源性親本抗體。

發明內容

本發明解決的問題在于提供具有高親和力的AEG-1/1E3單克隆抗體，包括其氨基酸和核苷酸序列，為構建高親和力、具有中和活性的抗AEG-1嵌合或人源化基因工程抗體提供支持。

本發明是通過以下技術方案來實現：

具有高親和力的AEG-1/1E3單克隆抗體，包括輕鏈和重鏈可變區，所述輕鏈可變區的3個互補決定區(CDR)序列分別為：

CDR1：Ser?Gln?Ser?Ile?Val?His?Thr?Asn?Gly?Asn?Thr；

CDR2：Tyr?Lys?Val；

CDR3：Cys?Phe?Gln?Gly?Ser?His?Val；