[發明專利]一種蛋白相互作用的檢測方法

無效

• 申請號: 201210016815.X
• 申請日: 2012-01-18
• 公開（公告）號: CN102590528A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 顏曉梅;吳麗娜;汪旭
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種蛋白的檢測方法，尤其是涉及一種結合流式細胞檢測技術與細菌雙雜交系統對單個細菌水平蛋白-蛋白相互作用進行快速檢測的方法。

背景技術

蛋白質是生物體中各種生理功能的主要執行者，蛋白質與蛋白質之間相互作用構成了細胞生化反應網絡的一個重要組成部分，不僅可以從分子水平揭示蛋白質的功能，而且為我們更好地理解生命過程、疾病機制和新藥開發等提供了一個很好的基礎。蛋白質相互作用研究方法分為體外和體內檢測兩大類，其中體外檢測主要包括免疫共沉淀、表面等離子共振分析、噬菌體展示、蛋白質芯片等([1]H.Guan，E.Kiss-Toth，Advanced?technologies?for?studies?on?protein?interactomes，Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.2008，110，1；[2]A.Droit，G.G.Poirier，J.M.Hunter，Experimental?and?bioinformatic?approaches?for?interrogating?protein-protein?interactions?to?determine?protein?function，J.Mol.Endocrinol.2005，34，263)，這些方法均需要對細胞進行破碎以提取蛋白，對所研究蛋白的濃度和純度有較高的要求，不僅操作繁瑣且無法在天然狀態下達成蛋白-蛋白相互作用。體內檢測手段主要包括酵母雙雜交、熒光共振能量轉移、蛋白質片段互補技術等([1]H.Guan，E.Kiss-Toth，Advanced?technologies?for?studies?on?protein?interactomes，Adv.Biochem.Eng.Biotechnol.2008，110，1)，這些技術在活細胞水平研究蛋白-蛋白相互作用，通過報告基因的表達產物可敏感地檢測到蛋白質之間微弱的、瞬間的相互作用；更具特色的是所有操作均在核酸水平上進行，無需純化蛋白。其中，最具代表性的酵母雙雜交系統(Y2H)已被廣泛地應用于發現新的蛋白質和蛋白質的新功能、研究抗原和抗體的相互作用、篩選藥物作用位點以及考察藥物對蛋白質之間相互作用的影響、繪制蛋白相互作用圖譜和發現可以用來診斷和治療的蛋白質標志物等領域([3]A.Bruckner，C.Polge，N.Lentze，D.Auerbach，U.Schlattner，Yeast?two-hybrid，a?powerful?tool?for?systems?biology，Int.J.Mol.Sci.2009，10，2763；[4]H.Yu，P.Braun，M.A.Yildirim，I.Lemmens，K.Venkatesan，et?al.High-quality?binary?protein?interaction?map?of?the?yeast?interactome?network，Science.2008，322，104；[5]I.Lemmens，S.Lievens，J.Tavernier，Strategies?towards?high-quality?binary?protein?interactome?maps，J.Proteomics.2010，73，1415；[6]B.Suter，S.Kittanakom，I.Stagljar，Two-hybrid?technologies?in?proteomics?research，Curr.Opin.Biotechnol.2008，19，316)。