[發明專利]抗口蹄疫病毒復制與感染的重組腺病毒及制備與應用

無效

• 申請號: 201210016518.5
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102586198A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 陳金頂;李銀光;趙明秋;徐艷芳;劉文俊;代曼曼
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/861;A61K48/00;A61P31/14
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 楊曉松;裘暉

技術領域

本發明屬于口蹄疫防治技術領域，特別涉及一種抗口蹄疫病毒復制與感染的重組腺病毒及制備與應用。

背景技術

口蹄疫(Foot-and-mouth?disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease?virus，FMDV)引起偶蹄類動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病感染率高，感染后發病率最高可達100％，易感動物多達70余種，其中重要的經濟畜種如豬、牛、羊等均易感。鑒于FMD不僅降低動物生產性能，造成巨大的直接經濟損失，而且還影響動物及動物產品的國際貿易，因此所造成的間接損失更大，同時還會影響一個國家的國際形象，故素有“政治經濟病”之稱。

各國學者對FMDV進行了廣泛而又深入的研究。FMDV屬小RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病毒屬(Aphthovirus)成員。該病毒有7個血清型，分別為A型、O型、C型、Asia?I型、SAT?I型、SAT?II型和SAT?III型，且血清型間無血清交叉反應和交叉免疫現象。各血清型又根據抗原親緣關系分為不同的亞型，其亞型間抗原也有很大的差異。

目前，FMD是嚴重威脅畜牧業發展的重要傳染病，發達國家主要采取撲殺為主的防控措施，發展中國家主要采取疫苗接種和撲殺相結合的方法。但是疫苗接種后需要至少七天的時間才能產生保護作用，同時由于FMDV血清型多，各血清型之間幾乎沒有交叉保護性，所以現在應用的單血清型疫苗難以達到對不同血清型和亞型的變異毒株產生保護作用。

RNA干擾(RNAinterference，RNAi)現象的發現為疾病防控開啟了希望之門。RNA干擾(RNA?interference，RNAi)是由功能性雙鏈RNA(double-strandedRNA，dsRNA)引發的序列特異性轉錄后同源靶基因沉默現象，是近幾年迅速發展起來的一項用于抑制病毒復制的新技術。科研人員將RNAi技術應用于多種病毒性疾病的治療研究，如艾滋病病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、禽流感病毒等；RNAi技術也為抗FMDV感染方面的研究提供了新的思路。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種抗口蹄疫病毒復制與感染的重組腺病毒。

本發明的另一目的在于提供所述抗口蹄疫病毒復制與感染的重組腺病毒的制備方法。

本發明的再一目的在于提供所述抗口蹄疫病毒復制與感染的重組腺病毒的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種抗口蹄疫病毒復制與感染的重組腺病毒，為腺病毒重組質粒pAdeno-3D-L-2B-VP1線性化后，經過包裝細胞包裝得到；

所述的腺病毒重組質粒pAdeno-3D-L-2B-VP1的載體為pAdeno-X，重組基因片段為四個串聯的、能分別獨立轉錄的基因片段；

所述的四個串聯的、能分別獨立轉錄的片段為U6啟動子與siRNA-3D的轉錄模板融合基因片段、U6啟動子與siRNA-L的轉錄模板融合基因片段、U6啟動子與siRNA-2B的轉錄模板融合基因片段和U6啟動子與siRNA-VP1的轉錄模板融合基因片段；

所述的重組基因片段優選為U6啟動子與siRNA-3D的轉錄模板融合基因片段、U6啟動子與siRNA-L的轉錄模板融合基因片段、U6啟動子與siRNA-2B的轉錄模板融合基因片段和U6啟動子與siRNA-VP1的轉錄模板融合基因片段依次串聯得到；

siRNA-3D的轉錄模板的核苷酸序列如下所示：

正義鏈為(5’-3’)：

ATCCTGCCACGGAGATCAAC

反義鏈為(5’-3’)：

GTTGATCTCCGTGGCAGGATtctcttgaa

siRNA-L的轉錄模板的核苷酸序列如下所示：

正義鏈為(5’-3’)：

ttcaagaga

反義鏈為(5’-3’)：

ACACCGGAATCGGCACCGCtctcttgaa

siRNA-2B的轉錄模板的核苷酸序列如下所示：

正義鏈為(5’-3’)：

ttcaagagaC；

反義鏈為(5’-3’)：

GCCAGATGCAGGAAGACATGCATGTCTTCCTGCATCTGG；

siRNA-VP1的轉錄模板的核苷酸序列如下所示：

正義鏈為(5’-3’)：