[發(fā)明專利]一種普那霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210015650.4
• 申請日: 2012-01-18
• 公開（公告）號: CN102586370A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊玉淮
• 申請（專利權(quán)）人: 石家莊佰銳生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/465
• 代理公司: 石家莊冀科專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 13108
• 代理人: 曹淑敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物工程領(lǐng)域，尤其是一種始旋鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)普那霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法。

背景技術(shù)

隨著抗生素的發(fā)現(xiàn)及臨床應(yīng)用，為人類健康水平的提高、平均壽命的延長作出了極其重大的貢獻(xiàn)。但隨著抗生素的應(yīng)用，病原菌表現(xiàn)出驚人的適應(yīng)性，一次又一次地創(chuàng)造了臨床幾乎無法解決的嚴(yán)重問題。因此，開發(fā)全新結(jié)構(gòu)的抗生素品種或具有獨特性能的新類型抗生素，將是21世紀(jì)抗生素領(lǐng)域研究開發(fā)的重要方向。

鏈陽性菌素是20世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)的由鏈霉菌產(chǎn)生的一組天然環(huán)肽。對治療重危感染者具有非常重要的臨床意義，因而日益受到人們的關(guān)注。A族鏈陽性菌素的代表物質(zhì)普那霉素ⅡA及普那霉素ⅡA的衍生物達(dá)福普汀，B族鏈陽性菌素典型代表物質(zhì)普那霉素ⅠA及其普那霉素ⅠA的衍生物奎奴普汀。普那霉素可作為萬古霉素的替代藥物，也可作為醫(yī)藥中間體用于合成奎奴普汀與達(dá)福普汀，因此具有良好的市場發(fā)展前景。

普那霉素又名原始霉素，是由始旋鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的一種鏈陽性菌素類抗生素。普那霉素對耐藥菌具有很好的殺菌效果，可為作為萬古霉素的替代藥物，在治療多重耐藥革蘭陽性菌引起的感染中有廣闊的應(yīng)用，但由于普那霉素水溶性極差，限制了其在臨床的應(yīng)用，普那霉素的衍生物奎奴普汀、達(dá)福普汀可以很好的解決上述問題，二者以30:70（W/W）比例混合制成的藥物在臨床上具有很好的治療效果和廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種保證普那霉素發(fā)酵產(chǎn)物中普那霉素Ⅱ和普那霉素Ⅰ比例為3:7的普那霉素的發(fā)酵；本發(fā)明還提供了采用該培養(yǎng)基的普那霉素的發(fā)酵方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所述的培養(yǎng)基含有：碳源2～10g/100ml，氮源2～7g/100ml，硫酸鹽0.25～1.2g/100ml和碳酸鈣0.1～0.8g/100ml。

本發(fā)明所述的碳源選自玉米淀粉、蔗糖、糊精、葡萄糖、小麥淀粉，土豆淀粉和玉米粉中的一種或幾種；所述的氮源選自黃豆餅粉、玉米蛋白粉、花生餅粉、酵母粉、玉米漿、酵母膏、蛋白胨、豆粕和棉子餅粉中的一種或幾種；所述的硫酸鹽選自硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、硫酸亞鐵和硫酸鋅中的一種或幾種。

本發(fā)明優(yōu)選的碳源為玉米淀粉和/或葡萄糖；優(yōu)選的氮源為黃豆餅粉、蛋白胨和/或酵母粉；優(yōu)選的硫酸鹽為硫酸銨和/或硫酸鎂。

本發(fā)明優(yōu)選的碳源含量為5g/100ml；優(yōu)選的氮源含量為4.95g/100ml；優(yōu)選的硫酸鹽含量為0.5g/100ml；優(yōu)選的碳酸鈣含量為0.4g/100ml。

本發(fā)明所述的培養(yǎng)基在發(fā)酵初始的pH最好為6.5。

本發(fā)明的發(fā)酵方法，是在上述任意一種培養(yǎng)基中發(fā)酵40～80小時。

優(yōu)選的發(fā)酵時間為60小時。

本發(fā)明所述的發(fā)酵期間補(bǔ)入的為氨基酸混合液，補(bǔ)料時間從第22小時持續(xù)到第60小時，每四小時補(bǔ)一次。

本發(fā)明優(yōu)選的氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸、脯氨酸和氨基丁酸中的一種或幾種；優(yōu)選的氨基酸混合液濃度為0.1～0.6g/100ml。

本發(fā)明更優(yōu)選的氨基酸混合液濃度為0.3g/100ml。

采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于：普那霉素在發(fā)酵產(chǎn)生鏈陽性菌素A和鏈陽性菌素B，其中鏈陽性菌素A為多聚不飽和大環(huán)內(nèi)酯，鏈陽性菌素B為環(huán)己縮肽，兩種產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)上有著明顯的差別，因此在同一發(fā)酵罐中需要進(jìn)行兩種代謝途徑，并各自形成產(chǎn)物。因此本發(fā)明結(jié)合兩種代謝途徑的異同，在培養(yǎng)基基礎(chǔ)配方和中間補(bǔ)料相結(jié)合的方法，最終達(dá)到控制兩種產(chǎn)物比例為3：7的目的。

本發(fā)明通過對培養(yǎng)基中原材料種類及配比的調(diào)整，可以提高發(fā)酵單位，而且可以使產(chǎn)物中普那霉素Ⅰ和普那霉素Ⅱ的比例為3:7左右，為后續(xù)生產(chǎn)奎奴普汀和達(dá)福普汀奠定了基礎(chǔ)，使后續(xù)的普那霉素衍生物生產(chǎn)更加的方便。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

實施例1：采用下述的普那霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法。