[發明專利]miRNA-122抑制劑在制備治療先天性心臟病的藥物中的應用

有效

• 申請號: 201210014228.7
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102580117A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 楊德業;黃曉燕;黃芳;施翔翔;周希
• 申請（專利權）人: 楊德業;黃曉燕;黃芳
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P9/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

(一)技術領域

本發明涉及miRNA-122抑制劑在制備治療先天性心臟病的藥物中的應用。

(二)背景技術

非編碼小分子RNA(miRNAs)是小分子量和內源性的RNA，調節基因的表達。miRNA可與靶mRNA分子的3’非編碼區(3′-UTR)互補序列結合，通過抑制mRNA的翻譯或直接使mRNA降解，在轉錄后水平達到基因沉默效果。研究發現miRNA不僅在發育調控、細胞增殖與凋亡、造血過程等方面發揮作用，并且對心臟的發生發育同樣有重要影響，miRNA在心臟存在高表達。

先天性心臟病(CHD)影響世界上1％的新生兒并且具有高發病率和死亡率特別是在1歲之內的嬰幼兒。先天性心臟病是一類常見的先天缺陷，約占人類所有先天缺陷的25％。室間隔缺損(VSD)作為最常見的先天性心臟病，其發病機制和致病因素仍未闡明。Pax-8基因屬于哺乳類Pax蛋白家族的轉錄因子，這一基因家族編碼的蛋白質都含有成對的結構域，一個保守的八肽和同源配對形式。這是一種核蛋白，參與甲狀腺濾泡細胞的發育和甲狀腺特異性基因的表達。Pax-8基因敲除小鼠有多種形式的心臟缺陷，特別是類似室間隔缺損和左心室擴大呈球形，其左心室壁和室間隔的細胞凋亡增加，此外，Pax-8基因在體外下調后細胞凋亡增加。因此，研究miRNA是否參與Pax-8基因敲除小鼠心臟結構發育的異常，可為VSD治療藥物篩選提供基礎。

(三)發明內容

本發明目的是提供miRNA-122抑制劑在制備治療先天性心臟病的藥物中的應用。

本發明采用的技術方案是：

miRNA-122抑制劑在制備治療先天性心臟病的藥物中的應用。

所述miRNA-122抑制劑用于制備治療室間隔缺損的藥物。

所述藥物通過抑制或降低miRNA-122表達來達到降低心肌細胞凋亡的作用。

所述miRNA-122抑制劑的RNA序列如下：5′-CAAACACCAUUGU?CACACUCCA-3′。

近年的研究發現，脊椎動物中存在很多miRNA，其在個體發育過程中，尤其是在細胞發育過程中起著重要的作用，同樣的miRNA在心肌損傷和凋亡的過程中也發揮了重要作用。Pax是機體內重要基因家族，其蛋白是一種重要的轉錄調節因子，在胚胎組織和器官的分化發育過程中起著重要的作用。Pax-8是哺乳類Pax家族的一員，Pax-8基因的表達具有組織的特異性，其基因敲除小鼠具有甲狀腺發育不良和甲狀腺功能低下。發明人之前研究發現Pax-8敲除小鼠模型其心臟出現室間隔缺損，電鏡均顯示左室壁和室間隔部位存在大量凋亡心肌細胞，細胞內線粒體數量明顯增多，體積明顯減小，因此Pax-8敲除小鼠可作為VSD藥物篩選的模型用于新藥的篩選研究。

本申請人通過研究miRNA-122表達對Pax-8基因敲除小鼠心肌細胞凋亡的影響發現，miRNA-122可能是VSD治療的一個新基因靶點，有選擇的調節miRNA-122表達，可以影響整個基因網絡，從而影響復雜的疾病表型。因此，miRNA-122抑制劑有望作為VSD治療的新藥物，廣泛應用于先天性心臟病的防治。

本發明的有益效果主要體現在：本發明發現了VSD治療的一個新基因靶點，提供了miRNA-122抑制劑在制備治療先天性心臟病尤其是室間隔缺損的藥物中的新用途，為新藥篩選提供了基礎。

(四)附圖說明

圖1為pax-8基因敲除小鼠鑒別；A和B為Pax-8?KO^-/-條帶；C為Pax-8?KO^+/-條帶；D為野生型小鼠條帶；

圖2為HE染色觀察Pax-8基因敲除純合子與雜合子小鼠心臟形態；A：箭頭所指為Pax-8^-/-小鼠的心臟室間隔缺損處(×400)；B：Pax-8^+/-小鼠的心臟基本上正常(×400)；

圖3為電子顯微鏡觀察Pax-8基因敲除純合子與雜合子小鼠心臟；A：Pax-8KO^-/-小鼠左心室壁細胞凋亡(6200×)；B：Pax-8KO^-/-小鼠左心室壁細胞線粒體數量增加，但形態變小(17500×)；C：Pax-8?KO^+/-小鼠左心室壁細胞線粒體未見明顯異常(17500×)；D：Pax-8?KO^-/-小鼠左心室壁細胞線粒體全景圖(3700×)；