[發(fā)明專利]重組非糖基化人促紅細(xì)胞生成素及其聚乙二醇修飾化產(chǎn)物的生產(chǎn)方法及用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210013932.0
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102586299A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王一飛;趙振嶺;利奕成;任哲
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州暨南生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/63;C07K14/505;C07K17/08;A61K38/18;A61K47/48;A61P7/06
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

1.一種融合基因，其編碼SUMO-rh-ngEPO融合蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合基因，其具有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

3.含有權(quán)利要求1或2所述融合基因的表達(dá)載體。

4.重組非糖基化人促紅細(xì)胞生成素（rh-ngEPO）的生產(chǎn)方法，包括如下步驟：

1）將權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入宿主菌中，誘導(dǎo)表達(dá)SUMO-rh-ngEPO融合蛋白；

2）分離純化SUMO-rh-ngEPO蛋白，切除SUMO部分，純化rh-ngEPO蛋白。

5.按照權(quán)利要求4的方法所得到的重組rh-ngEPO蛋白。

6.一種聚乙二醇修飾化促紅細(xì)胞生成素的制備方法，包括如下步驟：

1）將權(quán)利要求5所述的rh-ngEPO蛋白與單甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-ALD）在3~5℃反應(yīng)20~28小時，加甘氨酸終止反應(yīng)；

2）分離純化得到聚乙二醇修飾的人促紅細(xì)胞生成素（PEG-rh-ngEPO）。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟1）是在pH?6.0，50?mmol/?L?的磷酸鹽緩沖液中進(jìn)行，所述rh-ngEPO蛋白的濃度為4.5~5.5mg/mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述rh-ngEPO蛋白與單甲氧基聚乙二醇丙醛的摩爾比為9~11：1。

9.根據(jù)權(quán)利要求6或8所述的方法，其特征在于，所述單甲氧基聚乙二醇丙醛為20kDa單甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-ALD-20kDa）。

10.權(quán)利要求6~9任一項所述的聚乙二醇修飾化促紅細(xì)胞生成素在制備促紅細(xì)胞生成類藥物中的應(yīng)用。