[發明專利]同時檢測泰樂菌素和替米考星殘留分析的免疫膠體金試紙條及其制備方法

無效

• 申請號: 201210013856.3
• 申請日: 2012-01-17
• 公開（公告）號: CN102590516A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 樂濤;徐建;牛曉東
• 申請（專利權）人: 重慶師范大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所 50211
• 代理人: 郭云

技術領域

本發明屬于食品藥物殘留免疫學快速檢測技術領域。具體涉及同時檢測泰樂菌素和替米考星多殘留膠體金免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

泰樂菌素(TYL)和替米考星(TIL)半合成大環內酯類畜禽專用抗生素，具有很強的抗菌活性，耐藥性低，抗菌譜廣，對所有的革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用，尤其是對多種支原體及螺旋體也具有很強的抑制作用。在畜牧生產上，泰樂菌素還用作飼料添加劑，促進動物生長。近年來，由于動物疾病流行，泰樂菌素和替米考星在畜牧獸醫上應用最多的藥物，在獸用的抗生素中占有重要的地位。在生產中，由于不合理的使用劑量和不遵守休藥期造成泰樂菌素和替米考星殘留，其殘留對消費者可產生毒性作用。我國和歐盟分別對泰樂菌素和替米考星在組織中殘留也制定了最高殘留限量(MRL)。為了控制泰樂菌素和替米考星殘留，保障消費者健康，有必要建立一種快速、有效的殘留檢測方法對其殘留進行監測。

現有的泰樂菌素和替米考星殘留檢測的方法主要為高效液相色譜(HPLC)分離，紫外和質譜檢測的儀器方法。雖然儀器方法在鑒定藥物種類和定量分析上表現出良好的性能，但由于其操作復雜、分析費用昂貴，而不適用于對大量樣品進行殘留篩選。ELISA方法靈敏度高、成本低，在藥物殘留檢測中應用也很廣泛，但該方法需要酶標儀等實驗室設備，分析時間長，在應用中有局限性。

發明內容

為解決以上技術問題，為解決以上技術問題，本發明的目的之一在于提供一種特異性強、靈敏度高、且操作簡單，對樣品簡單處理即可檢測TYL、TIL藥物殘留的免疫膠體金試紙條。

本發明目的之二在于提供一種制備同時檢測泰樂菌素和替米考星多殘留膠體金免疫層析快速檢測試紙條的方法。

本發明目的之一是這樣實現的：一種檢測喹惡林-2-羧酸藥物殘留的免疫膠體金試紙，包括背板(2)，該背板(2)上設置手控區、測試區和樣品端，所述測試區位于背板(2)中部，所述手控區和樣品端位于背板(2)兩個端部，其關鍵在于：所述手控區由吸水墊(3)和手控區封膜(1)組成，所述吸水墊(3)粘附在背板(2)，該吸水墊(3)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附手控區封膜(1)，所述測試區為粘附在背板(2)上的硝酸纖維素膜(4)，所述硝酸纖維素膜(4)上包被有兔抗鼠的IgG質控線(5)和包被有DES-BSA檢測線(6)，所述樣品端由結合墊(7)、樣品墊(8)和樣品端封膜(9)組成，所述背板(2)上由測試區到外端依次粘附結合墊(7)和樣品墊(8)，該樣品墊(8)搭在結合墊(7)上，所述樣品墊(8)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附樣品端封膜(9)。

本發明目的之二是這樣實現的：檢測喹惡林-2-羧酸藥物殘留的免疫膠體金試紙的制備方法，按如下步驟進行：

1)將半抗原去碳霉糖泰樂菌素與牛血清白蛋白偶聯合成偶聯物DES-BSA；

2)將步驟1)合成的2種偶聯物免疫原免疫小鼠，通過細胞融合篩選得到抗TYL和TIL藥物單克隆細胞株，分別將得到單克隆細胞株注射小鼠腹腔，得到抗TYL和TIL藥物單抗體，該抗體與TYL和TIL有較高的交叉反應；

3)用檸檬酸三鈉與氯金酸反應制備膠體金；

4)提取小鼠IgG免疫健康家兔，得到兔抗鼠IgG抗體；

5)將步驟2)制成的抗TYL和TIL單克隆抗體加入步驟3)制備的膠體金中，得到抗TYL和TIL單克隆抗體-膠體金標記物；

6)將抗TYL和TIL單克隆抗體-膠體金標記物包被在結合墊上；

7)將步驟1)合成DES-BSA分別包被在硝酸纖維素膜(4)得到檢測線(6)；

8)將步驟4)兔抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜(4)得到質控線(5)；

9)將手控區封膜(1)、吸水墊(3)、硝酸纖維素膜(4)結合墊(7)、樣品墊(8)和樣品端封膜(9)依次粘貼在背板(2)上。