[發(fā)明專利]一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽及其制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210013828.1 | 申請(qǐng)日： | 2012-01-17 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102586374A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-07-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 廖丹葵;伍善廣;蘭雄雕;韋藤幼;孫建華;童張法 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣西大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12P21/06 | 分類號(hào)： | C12P21/06;C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 530004 廣西*** | 國(guó)省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 血管 緊張 轉(zhuǎn)化 抑制 及其 制備 方法 | ||
1.一種制備長(zhǎng)蛇鯔魚(yú)肉蛋白血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的方法，其特征在于以長(zhǎng)蛇鯔魚(yú)肉蛋白為原料，采用枯草芽孢桿菌1398所產(chǎn)生的中性蛋白酶水解，具體工藝為：
(1)往長(zhǎng)蛇鯔魚(yú)肉蛋白粉加水制成蛋白含量為2～5％的反應(yīng)原料液；然后往反應(yīng)原料液中，加入0.5～5％中性蛋白酶，在35～55℃及pH為6.0～7.5下水解2小時(shí)，最后加熱至100℃滅酶5～20min得到酶解液；
(2)用分子量為5000Da的超濾膜將酶解液超濾，對(duì)超濾透過(guò)液以水為流動(dòng)相通過(guò)Sephedex?G-15凝膠層析柱進(jìn)行分離，層析柱流出液用蛋白核酸檢測(cè)儀在220nm處進(jìn)行進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)譜圖(見(jiàn)圖1)收集3號(hào)吸收峰的流出液得到純化液；
(3)以C18為色譜柱、水和乙腈為流動(dòng)相以及220nm檢測(cè)波長(zhǎng)二極管陣列檢測(cè)器監(jiān)測(cè)，采用高效反相液相色譜對(duì)純化液進(jìn)行二次分離，其中第一次分離以流動(dòng)相水和乙腈比例為95∶5-50∶50，流速0.5mL·min-1，根據(jù)檢測(cè)譜圖(見(jiàn)圖2)收集7號(hào)吸收峰的流出液；第二次對(duì)7號(hào)吸收峰流出液進(jìn)行洗脫梯度分離，第一階段的流動(dòng)相水和乙腈比例為95∶5-80∶20，維持時(shí)間為8min，第二階段的流動(dòng)相水和乙腈比例為80∶20-70∶30，維持時(shí)間為16min，二階段流動(dòng)相的流速均0.5mL·min-1，根據(jù)檢測(cè)譜圖(見(jiàn)圖3)收集2號(hào)吸收峰的流出液；最后對(duì)2號(hào)吸收峰流出液冷凍干燥即得血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽；
所述長(zhǎng)蛇鯔魚(yú)肉蛋白血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽的氨基酸序列為Ser-Pro-His-Tyr-Arg(絲氨酸-脯氨酸-組氨酸-酪氨酸-精氨酸)。
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