[發(fā)明專利]一株產(chǎn)蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶的菌株及用該酶生產(chǎn)菊糖的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210012021.6
• 申請(qǐng)日: 2012-01-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102533606A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江波;張濤;李潤(rùn)靜;沐萬(wàn)孟;繆銘
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N9/10;C12P19/18;C13K3/00;C12R1/085
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.一株產(chǎn)蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶的菌株，其分類命名為蠟狀芽孢桿菌（Bacillus?cereus）SK21.001，已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M?2011462。

2.用權(quán)利要求1所述的CCTCC?NO：M?2011462菌株發(fā)酵生產(chǎn)蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶的方法，其特征在于步驟為：

（1）種子培養(yǎng)

種子培養(yǎng)基：酵母膏1-10g/L，蛋白胨1-20g/L，葡萄糖1-40g/L，pH6.0-8.0，去離子水配制；

種子培養(yǎng)條件：CCTCC?NO：M?2011462菌株于30-37℃、150-250rpm的振蕩速度下在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)10-20h活化該菌株；

（2）發(fā)酵培養(yǎng)

發(fā)酵培養(yǎng)基：酵母膏1-20g/L，蛋白胨1-20g/L，蔗糖1-30g/L，pH6.0-8.0，去離子水配制；

發(fā)酵條件：接種量1%-10%，30-37℃、攪拌速度100-700rpm、空氣流量0.1-1.0vvm的條件下在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵10-48h生產(chǎn)蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶；

（3）發(fā)酵后處理

發(fā)酵液經(jīng)冷凍離心后收集上清液即為粗酶液，經(jīng)檢測(cè)酶活達(dá)到1-25U/mL；

所得粗酶液進(jìn)一步超濾濃縮，或用硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)，離心和冷凍干燥得到蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶的粗酶粉。

3.用權(quán)利要求2所述方法制備的蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)化蔗糖生產(chǎn)菊糖的方法，其特征在于：

向底物蔗糖溶液中添加蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行催化轉(zhuǎn)化生產(chǎn)菊糖，轉(zhuǎn)化條件為：蔗糖溶液的蔗糖質(zhì)量濃度為10%-50%，蔗糖果糖轉(zhuǎn)移酶添加量0.5-50U/g蔗糖，pH4.0-8.0，轉(zhuǎn)化反應(yīng)溫度為40-60℃，轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)間24-72h，轉(zhuǎn)化率達(dá)10%以上，得到含有菊糖的酶反應(yīng)液，進(jìn)一步加工處理用來(lái)制備菊糖糖漿或菊糖粉末。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于菊糖糖漿的制備方法，步驟為：

（1）脫色

在含有菊糖的酶反應(yīng)液中添加0.2%-2.0%的活性炭，在50-80℃下溫育10-60min，然后進(jìn)行硅藻土過(guò)濾，取脫色液；

（2）濃縮

將脫色液真空蒸發(fā)濃縮至固形物質(zhì)量含量為10%-70%，即得菊糖糖漿。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于菊糖粉末的制備方法，步驟為：

（1）脫色

同菊糖糖漿的制備所述脫色步驟；

（2）濃縮

將脫色液真空蒸發(fā)濃縮至固形物質(zhì)量含量為10%-70%的濃縮液；

（3）噴霧干燥

控制進(jìn)風(fēng)溫度150-200℃、出風(fēng)溫度50-100℃，將菊糖濃縮液噴霧干燥，得到菊糖粉末。