[發明專利]胱氨酸蛋白酶抑制劑C檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210011986.3
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102590497A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 鄒炳德;鄒繼華;方亮
• 申請（專利權）人: 寧波美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/545
• 分類號: G01N33/545
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 李迎春

技術領域

本發明涉及一種醫學檢測試劑盒，具體涉及一種運用膠乳增強免疫比濁法測定人血清中胱氨酸蛋白酶抑制劑C的試劑盒。

背景技術

胱氨酸蛋白酶抑制劑C(cys-c，分子量13kD)，簡稱胱抑素C，是半胱氨酸蛋白酶抑制劑家族中的一員。在人體組織，器官中幾乎所有的有核細胞都會生產胱氨酸蛋白酶抑制劑C。由于該蛋白質分子量小，在正常的腎臟中，它能夠自由地通過腎小球膜被濾出，然后近乎全部地被腎臟近端小管上皮細胞重吸收和分解。因此，可以通過血液中胱抑素C的濃度來反映腎小球的過濾速率。而且，胱抑素C血清濃度不受敏癥過程、性別、年齡和肌肉重量影響的特點使它成為一種優于血清肌酐和β₂-微球蛋白的反應腎小球過濾速率的理想的內源性標記物。最近，大量研究表明血清胱抑素C是一種能比血清肌酐更好的反映出腎小球過濾速率的標記物，從而用來早期診斷腎臟疾病。檢測血清中胱抑素C濃度的方法包括有酶聯免疫法，免疫比濁法，放射免疫法，熒光免疫測定法等，但是除了上述的測定方法外，現今應用最多的就是膠乳增強免疫透射比濁法，其原理是將抗體通過化學交聯或者物理吸附的方法標記在表面帶有羧基或沒有帶羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒上，抗體和待測物中相應的抗原結合形成復合物后，使包被抗體的膠乳顆粒之間發生凝集。膠乳凝集的越多，越會阻礙光線的透過性，反應液的吸光度就越大。所以，反應液吸光度的大小和膠乳顆粒凝集程度是成正比的，更近一步地來說，待測物中抗原的濃度是和反應吸光度成正比的。由此采用膠乳顆粒增強的免疫透射比濁法來測定血清中胱抑素C的含量。

該膠乳增強免疫透射比濁法可以通過物理吸附法把多克隆抗體標記在不帶羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒上，但是采用物理吸附法得到的致敏膠乳顆粒穩定性比較差，而且物理吸附的效果也不好，很容易會造成抗體從膠乳顆粒表面脫落。為了避免上述的物理吸附的弱點，目前通過化學交聯法把抗體標記在表面帶羧基的膠乳顆粒上。通過化學共價交聯，抗體和膠乳的結合力更強，有抗體包被的膠乳顆粒穩定性更高。通過上述化學交聯方法制備的檢測試劑盒，會造成靈敏度高，特異性好、準確性高、抗干擾能力高及生產成本低的優點。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種空白吸光度低；檢測靈敏度，準確度高；精密度好，檢測范圍內線性好，穩定性好；生產成本低的胱氨酸蛋白酶抑制劑C檢測試劑盒。

本發明所采用的技術方案為：

一種胱氨酸蛋白酶抑制劑C檢測試劑盒，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2，所述試劑R1為促進抗體抗原特異性結合的反應液；所述試劑R2是抗人胱抑素C抗體包被的聚苯乙烯膠乳顆?；旌衔?，置于適當的緩沖液中。本發明上述試劑盒中試劑R1與試劑R2的容積比為5∶1。

所述試劑R1的各組分及濃度范圍為：

作為優選，所述試劑R1的各組分及濃度范圍為：

作為進一步優選，所述試劑R1的各組分及濃度范圍為：

作為優選，所述試劑R2中的緩沖液為甘氨酸。

所述試劑R1和試劑R2中甘氨酸的pH值為5.5-8.5，進一步優選為6.5-7.5。

作為優選，所述試劑R2中聚苯乙烯膠乳顆粒混合物為大、小兩種直徑的聚苯乙烯膠乳顆粒的混合物(該聚苯乙烯膠乳顆粒為市售常規產品)，大直徑聚苯乙烯膠乳顆粒平均粒徑為130nm～300nm，小直徑聚苯乙烯膠乳平均粒徑為20nm～60nm，其中聚苯乙烯膠乳顆粒混合物的含量為0.1～0.5％，大直徑聚苯乙烯膠乳顆?！眯≈睆骄郾揭蚁┠z乳顆粒＝8～9∶2～1。

本發明上面所述的大直徑膠乳顆粒，其平均粒徑在130nm～300nm之間，小直徑膠乳顆粒，其平均粒徑在20nm～60nm之間，在制備試劑的過程中，使用超濾的方法以達到清洗膠乳和置換緩沖液的目的。對于大直徑膠乳顆粒來說，優點是膠乳表面積跟自身體積的比率小，很容易在表面包被的抗體和抗原形成復合物后產生明顯的凝集現象，從而導致吸光度的變化。因此能測得濃度比較低的分析物。缺點是由于表面積跟自身體積比率小的原因，單位體積內表面羧基含量少，造成單位體積內抗體包被量小，很容易造成抗原過剩的結果。因此很難測濃度高的分析物。小直徑膠乳表面積跟自身體積比率大，對測量結果的影響剛好和大膠乳相反。所以本發明在制備試劑盒過程中，選用大小兩種膠乳顆粒的混合物，這樣能使試劑的空白吸光度低，靈敏度高，線性好。

本發明上面所述抗人胱抑素C抗體為兔抗人胱抑素C多克隆抗體。