[發明專利]一種白色念珠菌多克隆抗體的制備方法

無效

• 申請號: 201210011793.8
• 申請日: 2012-01-16
• 公開（公告）號: CN103204929A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 王東東;何永勝;周澤奇;李寧;史東東;粟艷;劉春龍
• 申請（專利權）人: 天津貽諾琦生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K16/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及念珠菌的多克隆抗體制備領域。具體而言，本發明涉及制備針對白色念珠菌甘露聚糖抗原的多克隆抗體。

背景技術

白色念珠菌是一種條件致病念珠菌，人體在正常情況下不會受到白色念珠菌的感染，只有機體免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制約作用失調時，可能感染白色念珠菌，引起深部感染，甚至全身散播性感染。

近年來由于人口老齡化，免疫抑制劑及廣譜抗生素的大量應用，艾滋病、惡性腫瘤發病率的增加，器官、骨髓移植及介入治療的廣泛開展，臨床上侵襲性念珠菌感染的發病率呈逐年上升趨勢。由于缺乏有效的診斷方法，侵襲性念珠菌感染后易造成漏診、誤診而延誤治療，因此，發展早期、快速且特異的侵襲性念珠菌感染診斷學方法成為臨床上迫切需要解決的問題。

目前臨床對于侵襲性念珠菌感染常規的診斷方法主要包括以下幾種：

(1)組織病理學診斷方法

在組織切片中找到病原念珠菌是確診的“金標準”，有念珠菌侵襲和相應的炎癥反應與組織損害或組織標本念珠菌培養陽性即可確定念珠菌感染的診斷。但組織病理學檢查取材需要侵入性操作，重癥患者難以耐受，可行性差。其敏感性受到取材的影響，一次切片未必能夠找到念珠菌成分，且侵襲性念珠菌感染可引起各種各樣的組織反應，給診斷帶來較大困難。

(2)直接鏡檢和培養

直接鏡檢是念珠菌學檢查最經典的方法，具有簡便、快速、實用的優點，可以在顯微鏡下直接觀察念珠菌形態。但直接鏡檢陽性率較低，陰性結果不能排除診斷，且同一菌屬內的多種念珠菌鏡下形態相似，對于菌種鑒定沒特別的幫助。而培養檢查需要結合菌落特征、生化試驗等進行詳細觀察，培養過程耗時長，有時需要數周時間重復多次接種才能得出正確結果，且敏感性和陽性率較低，同時對操作人員的技術經驗要求高，不利于早期診斷。

(3)影像學檢查

動態影像學檢查對提示診斷具有重要作用，胸部CT掃描，特別是高分辨率CT的臨床應用對早期診斷價值較高。但影像學檢測特異性較差，接合菌、鐮孢菌、放線菌、奴卡菌、金黃色葡萄球菌等血管侵襲性感染在影像學上可能與侵襲性真菌相似，所以影像學檢查通常只能作為輔助診斷手段。

甘露聚糖(mannan)是白色念珠菌細胞壁的主要抗原成分。對于白色念珠菌感染的診斷，除了傳統的培養方法，測定血清中白色念珠菌甘露聚糖抗原，逐漸成為白色念珠菌早期診斷的簡單、快捷的方法。

免疫檢測技術是利用抗原抗體間能特異性結合反應，通過檢測標記在反應物上的標記物，對抗原或抗體實現定性或定量檢測的方法。根據標記物質的不同，分為酶聯免疫分析技術(Enzyme-Linked?Immunosorbant?Assay，ELISA)、免疫熒光檢測技術、化學發光免疫分析技術、免疫微球技術、免疫膠體金技術等。其中ELISA技術具有操作簡單，靈敏度高，檢測時間短的特點，在臨床檢測和科學研究中被廣泛使用。

而測定抗原作為白色念珠菌感染診斷方法的關鍵，便是得到針對白色念珠菌甘露聚糖抗原的抗體。所以，迫切需要一種方法能夠制備針對白色念珠菌甘露聚糖抗原的多克隆抗體。

本發明詳細描述

本發明的目的在于提供一種制備針對白色念珠菌甘露聚糖抗原的多克隆抗體的方法。

本發明所采用的白色念珠菌購買自中國醫學微生物菌種保藏管理中心。

本發明技術方案如下：

步驟：

1.提取白色念珠菌甘露聚糖抗原。

2.將白色念珠菌甘露聚糖抗原免疫動物。

3.從經免疫的動物中分離、純化抗血清，得到針對白色念珠菌甘露聚糖的多克隆抗體。

本發明中，步驟1所使用的抗原為天津貽諾琦生物工程有限公司專有技術提取(提取方法見專利201110240946.1)。

步驟2中，免疫方法的選擇是多種多樣的，如背部皮下多點注射法、腹腔注射法等，免疫劑量可為0.3-2mL/只，并且用于制備白色念珠菌多克隆抗體的動物可為兔、雞、鼠、羊、馬、豬或驢。

步驟3中，為了得到效價較高的抗體，還應每隔7-10天測定免疫動物抗血清的抗體效價，當抗體效價達到最大值時，可從經免疫的動物中分離、純化抗血清；所述純化抗血清的方法可為飽和硫酸銨鹽析沉淀法和/或親和層析法。

用上述方法制備的白色念珠菌多克隆抗體是本發明所要保護的。

本發明的多克隆抗體可用于白色念珠菌抗原的免疫檢測中。使用的技術可以為ELISA技術、免疫膠體金技術、化學發光免疫測定技術等免疫學檢測技術。