[發明專利]一種新型隱球菌多克隆抗體的制備方法

無效

• 申請號: 201210011792.3
• 申請日: 2012-01-16
• 公開（公告）號: CN103204928A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 史東東;何永勝;周澤奇;李寧;王東東;粟艷;彭潔
• 申請（專利權）人: 天津貽諾琦生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C07K16/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及抗體及其制備方法，特別是用于針對新型隱球菌莢膜多糖(Glucuronoxylom-annan，GXM)抗原的一種多克隆抗體及其制備方法。

背景技術

新型隱球菌(Crytococcus?Neoformans)是一種重要的條件致病菌，常感染免疫能力低下或免疫能力缺陷的患者，導致以中樞神經系統感染為主的深部真菌感染，病死率很高。

近年來由于廣譜抗菌藥物、腎上腺皮質激素、腫瘤化療、放療和器官移植后免疫抑制劑的長期廣泛應用，以及艾滋病的流行，真菌性腦膜炎明顯增多。而新型隱球菌性腦膜炎(以下簡稱“隱腦”)是由新型隱球菌所致的最常見的中樞神經系統疾病。隱腦占所有新型隱球菌感染導致疾病的80％左右。隱腦臨床表現復雜，癥狀不典型，因而很難診斷，約80％的隱腦患者會被誤診為結核性腦膜炎。目前國際上開展的檢測方法主要有以下3大類：

1.印度墨汁染色法，該法敏感性差，陽性檢出率很低；

2.血培養或腦脊液培養等培養的方法，該法敏感性差，陽性檢出率不高；

3.免疫學檢測法：用特異性針對新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的抗體實現對新型隱球菌的檢測，檢測血液和腦脊液的敏感性都能達到85％以上。免疫學檢測方法靈敏度和特異性都較前兩種方法有明顯的優勢，正逐漸成為新型隱球菌檢測的常用方法。

免疫檢測技術是利用抗原抗體間能特異性結合反應，通過檢測標記在反應物上的標記物，對抗原或抗體實現定性或定量檢測的方法。根據標記物質的不同，分為酶聯免疫分析技術(Enzyme-Linked?Immunosorbant?Assay，ELISA)、免疫熒光檢測技術、化學發光免疫分析技術、免疫微球技術、免疫膠體金技術等。其中ELISA技術具有操作簡單，靈敏度高，檢測時間短的特點，在臨床檢測和科學研究中被廣泛使用。

在新型隱球菌的臨床檢測中，目前國際市場上有為數不多的免疫檢測產品，如：Meridian公司的乳膠凝集法和ELISA法檢測試劑盒產品，IMMY公司的乳膠凝集法產品和膠體金法產品，Bio-Rad公司的乳膠凝集法產品。我國國內并沒有真正用于新型隱球菌臨床檢測的免疫學檢測產品。而免疫學檢測產品的關鍵在于能否得到合適的抗體，因此，制備針對新型隱球菌莢膜多糖GXM抗原的抗體成為開發該抗原檢測產品的關鍵。

多糖類物質因為結構特殊、免疫原性差、結構類似，很多是半抗原，很難像蛋白免疫原一樣容易得到單克隆抗體，經常需要對抗原表位進行化學修飾，使其成為完全抗原才能進行免疫。國內目前并未見關于抗新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的多克隆抗體制備的報道。

綜上所述，在新型隱球菌臨床檢測領域，迫切需要制備出抗新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的抗體。

本發明詳細描述

本發明的目的在于提供一種抗新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的多克隆抗體。

本發明的目的在于提供一種制備抗新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的多克隆抗體的方法。

本發明所使用的新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM由天津貽諾琦生物工程有限公司提供(專利申請號：201110240065.X)。

本發明技術方案如下：

步驟：

1.用GXM抗原免疫動物。

2.測定免疫后動物的血清效價，從免疫后的動物體內取血。

3.用飽和硫酸銨鹽析法和親和層析法對血清進行純化，得到純化的多克隆抗體。

上述步驟2中免疫的方法是多種多樣的，如：脾內注射法，腹腔注射法等。免疫劑量可視具體動物種類而定。用于制備GXM多克隆抗體的動物可以是鼠、兔、雞、羊、馬、豬、驢等可用于免疫的動物。

上述步驟3中免疫后的動物可處死后采血，也可以不處死，飼養過程中每次采一定量的血。

上述步驟4中用于抗體純化的方法可以是飽和硫酸銨鹽析沉淀法和親和層析法等。

用上述方法制備得到的多克隆抗體及其他種屬來源的多克隆抗體是需要本發明保護的。

本發明提供了一種抗新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的多克隆抗體，及抗新型隱球菌莢膜多糖抗原GXM的多克隆抗體的制備方法。在本發明的制備方法中，GXM抗原是從新型隱球菌的培養物中制得(專利申請號：201110240065.X)，該抗原為國內首例提純的新型隱球菌莢膜多糖抗原，因而本發明得到的多克隆抗體為國內首例抗新型隱球菌莢膜多糖抗原的多克隆抗體，填補了國內空白。

實驗證明，用本發明所屬方法制得的多克隆抗體具有效價高，特異性好的特點，有很強的應用前景。

附圖描述：