[發明專利]艱難梭菌外毒素A檢測試劑盒及組成該試劑盒的單克隆抗體

有效

• 申請號: 201210011666.8
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102590515A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 張春華;王世霞;金柯;黃祖瑚;盧山
• 申請（專利權）人: 張春華;王世霞;金柯;黃祖瑚;盧山
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;A61K39/40;A61P31/04;C12N5/20;C07K16/12;C12R1/91
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及艱難梭菌外毒素A檢測試劑盒及組成該試劑盒的單克隆抗體。

背景技術

艱難梭菌是一種革蘭氏染色陽性、有芽胞、專性厭氧的梭狀桿菌。當前，艱難梭菌感染的預防、診斷、治療面臨著重重困難。一方面，艱難梭菌廣泛存在于院內環境中，而且作為其休眠形式的芽胞能夠耐受多種院內常用的消毒劑，它已經成為僅次于彎曲桿菌的院內感染性腹瀉的主要病原體；甲硝唑、萬古霉素，作為治療艱難梭菌感染的兩種主要的藥物，它們的耐藥性也在不斷地累積、傳播，療效日趨降低，而且對于復發病例的治療，這兩種藥物呈現出無能狀態。另外一方面，到目前為止，尚無有效的、商品化的疫苗問世；基于毒素的ELISA檢測試劑盒價格昂貴，難以對艱難梭菌進行臨床常規檢測，也不適用于大規模的流行病學調查和長期監測；治療性抗體作為一種安全、有效、廉價的抗生素替代品，前景光明卻依然處于探索期。所以，急需開發安全、有效、方便、廉價的艱難梭菌疫苗來保護高危人群，在疫苗的基礎上開發相應的單克隆抗體，為診斷試劑及治療性抗體提供可能。

艱難梭菌通過糞口途徑進入消化道，繼而分泌外毒素而導致腹瀉。毒素A既是一種腸毒素，又是一種細胞毒素，是艱難梭菌致病的主要毒力因子之一。研究發現，艱難梭菌外毒素A只有當其羧基端與靶細胞表面受體結合后才能夠發揮毒性作用；艱難梭菌外毒素A的分子表面結構大部分為其羧基端所覆蓋；針對艱難梭菌外毒素A羧基端的抗體，能有效抑制其腸毒性和細胞毒性，具有保護效應。所以，艱難梭菌外毒素A羧基端是疫苗研究和抗體開發的理想結構域。

DNA免疫是近年發展起來的一種新型抗體制備法。DNA免疫克服了傳統蛋白質免疫方法的缺陷，能更為有效地激活機體的體液和細胞免疫應答。首先是在僅知DNA編碼而不能獲得目的蛋白，或獲得的蛋白為低免疫性的情況下，通過DNA免疫可產生高效價特異性的抗體，這為單抗制備提供了一種簡單易行的方法。同時DNA免疫因為存在體內抗原表達和遞呈的過程，所以它最接近活細菌感染機體免疫反應過程并且很完整保存了抗原構象，由此產生的抗體對構想表位有更好的特異性，因此增加了得到具有中和抗體活性單抗的可能性。DNA免疫制備單抗為疾病的診斷和治療提供新的思路。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測艱難梭菌外毒素A的試劑盒。

本發明的另一目的是提供組成該試劑盒的兩株單克隆抗體。

本發明的又一目的是提供所述兩株單克隆抗體的應用。

本發明的目的通過如下技術方案實現：

一種檢測艱難梭菌外毒素A的試劑盒，包含兩種識別不同表位的抗艱難梭菌外毒素A羧基端抗原的單克隆抗體，分別為保藏號為CGMCC?No.4979的雜交瘤細胞產生的抗艱難梭菌外毒素A羧基端抗原的單克隆抗體以及保藏號為CGMCC?No.4980的雜交瘤細胞系產生抗艱難梭菌外毒素A羧基端抗原的單克隆抗體。

所述的辣根過氧化物酶標記的由保藏號為CGMCC?No.4980的雜交瘤細胞系產生抗艱難梭菌外毒素A羧基端抗原的單克隆抗體的稀釋度為1∶2000。

分泌抗艱難梭菌外毒素A羧基端單克隆抗體的雜交瘤細胞系，保藏號為CGMCC?No.4979，保藏日期為2011年6月23日。

一種抗艱難梭菌外毒素A羧基端抗原的單克隆抗體，由所述的保藏號為CGMCC?No.4979的雜交瘤細胞系產生。

所述的單克隆抗體在制備艱難梭菌外毒素的診斷試劑中的應用。

所述的單克隆抗體在制備治療艱難梭菌外毒素感染的藥物中的應用。

分泌抗艱難梭菌外毒素A羧基端單克隆抗體的雜交瘤細胞系，保藏號為CGMCC?No.4980，保藏日期為2011年6月23日。

一種抗艱難梭菌外毒素A羧基端抗原的單克隆抗體，由所述的保藏號為CGMCC?No.4980的雜交瘤細胞系產生。

所述的單克隆抗體在制備艱難梭菌外毒素的診斷試劑中的應用。

所述的單克隆抗體在制備治療艱難梭菌外毒素感染的藥物中的應用。

本發明的有益效果：

1、目前，國內尚無合適的檢測艱難梭菌感染的診斷試劑盒，而國際上已研發成功的試劑盒價格昂貴，這也阻礙了國內艱難梭菌診斷的發展，本發明提供的艱難梭菌外毒素檢測試劑盒，通過使用兩株高親和力的配對單抗，使檢測艱難梭菌的靈敏度達到了國際標準。這一試診斷試劑盒的開發可極大的促使國內開展廣泛艱難梭菌的研究，同時也可以對艱難梭菌感染進行大規模的流行病學調查和長期的監測。