[發(fā)明專利]一種鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210011525.6
• 申請日: 2012-01-15
• 公開（公告）號: CN102680715A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 孔濤;楊自軍;張才;趙振升;郝雪琴;周變?nèi)A;常景周;李潤樂;魏迎軍;李嘉嘉;王振華
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/531
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

本發(fā)明一種鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙，同時還涉及一種該鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙的制備方法，屬于殘留的免疫化學速測技術領域。

背景技術

鄰苯二甲酸酯類化合物(PAEs)又稱酞酸酯，是一類環(huán)境雌激素，是常用增塑劑之一。被普遍應用于玩具、食品包裝材料、醫(yī)用血袋和膠管、乙烯地板和壁紙、清潔劑、潤滑油、個人護理用品(如指甲油、頭發(fā)噴霧劑、香皂和洗發(fā)液)等數(shù)百種產(chǎn)品中。鄰苯二甲酸酯可干擾內(nèi)分泌，使男性精子數(shù)量減少、運動能力低下、形態(tài)異常，嚴重的還會導致死精癥和睪丸癌，是造成男性生殖問題的“罪魁禍首”，甚至影響胚胎發(fā)育，表現(xiàn)出殖發(fā)育毒性。

由于塑化劑對環(huán)境及人類健康的危害，WHO?1995年公布，鄰苯二甲酸酯類化合物是必須控制一類擾亂內(nèi)分泌的化學物質(zhì)。基于PAEs在環(huán)境中的富集作用對人類健康造成的嚴重危害，EPA(美國國家環(huán)保局)將6種PAEs列為優(yōu)先控制污染物：即鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二異辛酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DOP)和鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)；8種PAEs被列入WWF(世界野生動物保護基金會)的環(huán)境激素名單中。在我國，DMP、DBP和DOP被列入“中國環(huán)境優(yōu)先污染物黑名單”。

目前，鄰苯二甲酸酯類化合物的檢測方法有分光光度法、薄層色譜法、氣相色譜法(GC)、氣相色譜/質(zhì)譜法(GC-MS)、高效液相色譜法(HPLC)。EPA的標準方法是GC-ECD-MS法，我國擬發(fā)布的標準方法是正相高效液相色譜法(NP-HPLC)。采用分光光度法分析PAEs時，只適用于PAEs總量的測定，在特定組分的檢測上具有一定的局限性，并且檢測限較高，難以適應微量檢測的需要。色譜法是國內(nèi)外比較常用的方法。在用GC-MS、HPLC方法檢測PAEs時，具有更好的靈敏度和選擇性。但這些方法大都需要復雜的前處理，昂貴的儀器設備，檢測費時費力且成本高，與其它檢測系統(tǒng)相比，一次檢測樣品量少，檢測時間長，不適合現(xiàn)場快速檢測，僅作為少數(shù)實驗室的確證方法，滿足不了環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品檢測快速簡便的需要。目前還沒有檢測鄰苯二甲酸酯的商品化的試劑盒和試紙條。因此，研究和建立具有我國自主知識產(chǎn)權的鄰苯二甲酸酯免疫學檢測方法，對提我國高環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品鄰苯二甲酸酯控制和監(jiān)測水平，保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全和消費者的健康具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種敏感度高、成本低、檢測時間短的鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙。

同時，本發(fā)明的目的還在于提供一種鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙的制備方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案采用了一種鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙，包括反應膜，結(jié)合物釋放墊，在反應膜上包被有鄰苯二甲酸二正辛酯-載體蛋白偶聯(lián)物的測試區(qū)和羊抗鼠IgG的質(zhì)控區(qū)，在結(jié)合物釋放墊上包被有鄰苯二甲酸二正辛酯單克隆抗體-膠體金標記物。

還包括樣本墊，吸水墊和襯板，所述樣本墊，結(jié)合物釋放墊、反應膜及吸水墊依次設置在襯板上。

所述的鄰苯二甲酸二正辛酯-載體蛋白偶聯(lián)物由鄰苯二甲酸二正辛酯經(jīng)過硝化與還原反應后形成4-氨基鄰苯二甲酸二正辛酯半抗原，然后再與載體蛋白偶聯(lián)得到。

所述的鄰苯二甲酸二正辛酯單克隆抗體-膠體金標記物中的鄰苯二甲酸二正辛酯單克隆抗體是以鄰苯二甲酸二正辛酯-載體蛋白偶聯(lián)物作為免疫抗原免疫試驗動物后制備獲得。

所述的載體蛋白為牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、卵清蛋白、鐵蛋白或多聚賴氨酸。

本發(fā)明的技術方案還采用了一種制備鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙的方法，包括以下步驟：

(1)制備包被鄰苯二甲酸二正辛酯單克隆抗體-膠體金標記物的結(jié)合物釋放墊；

(2)制備具有包被鄰苯二甲酸二正辛酯-載體蛋白偶聯(lián)物的測試區(qū)和包被羊抗鼠IgG的質(zhì)控區(qū)的反應膜；

(3)將步驟(1)制備好的結(jié)合物釋放墊和(2)制備好的反應膜分別與樣本墊、吸水墊和背襯組裝成試紙。

本發(fā)明的制備鄰苯二甲酸二正辛酯快速檢測用膠體金試紙的方法，具體包括以下步驟：

(1)半抗原制備：將鄰苯二甲酸二正辛酯與經(jīng)過硝化與還原反應后形成4-氨基鄰苯二甲酸二正辛酯半抗原；

(2)將鄰苯二甲酸二正辛酯與載體蛋白偶聯(lián)，形成鄰苯二甲酸二正辛酯-載體蛋白偶聯(lián)物；