[發明專利]適于SLμCUT系統的小麥異代換系染色體標本制備及微切割方法

無效

• 申請號: 201210011491.0
• 申請日: 2012-01-15
• 公開（公告）號: CN102676499A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 王黎明;李興鋒;王春平;董普輝;袁瑛;袁建國;高居榮;王洪剛
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

適于SL?μCUT系統的小麥異代換系染色體標本制備方法與微切割，屬于分子細胞遺傳學領域。?

背景技術

染色體微切割、微分離與微克隆(chromosome?micro-dissection?and?micro-cloning)技術是由Scalenghe等(Scalenghe?F.，E.Turco，J.E.Edstrom，et?al.Microdissection?and?cloning?of?DNA?from?a?specific?region?of?Drosophila?melanogaster?polytene?chromosome[J].Chromosoma，1981，82：205-216)創立的一項分子細胞遺傳學新技術。該技術首先對果蠅染色體進行了切割，成功獲得了80個克隆，隨后用于鼠和人類(Rohme?Dan，Howard?Fox，Bernhard?Herrmann，et?al.Molecular?clones?of?the?mouse?complex?derived?from?microdissected?metaphase?chromosomes[J].Cell，1984，36：783-788.)。隨著PCR技術的發展，微切割和微克隆技術得到了較大發展(Ludecke?HJ，Gabriele?Senger，Use?Claussen，et?al.Cloning?defined?regions?of?human?genome?by?microdissection?of?banded?chromosomes?and?enzymatic?amplification[J].Nature，1989，338：348-350)。自Sandery等(Sandery?M?J，et?al.Isolation?of?sequence?common?to?A?and?B?chromosomes?of?rye??(Secale?cereal?L.)by?micro?cloning[J].Plant?Molecular?Biology?Reporter，1991，9(1)：21-30)利用染色體微切割和微克隆技術獲得了黑麥DNA克隆以來，該技術在植物染色體文庫的構建、特異探針篩選、抗性基因的克隆以及遺傳與進化研究上得到了較為廣泛應用，但是，相比較而言，植物在這方面開展的研究仍然滯后于動物和人類。目前，植物染色體顯微切割技術主要存在以下幾個方面的困難：?

(1)植物細胞壁的存在、同步化的困難，阻礙了良好分散染色體標本的制備。背景不干凈，影響了切割效率。可以說，染色體標本的制備是影響染色體切割最基礎的技術之一。?

(2)植物基因組倍性多樣，染色體結構變異大，基因排列順序不夠保守；植物染色體DNA含量高、蛋白質含量低，絕大多數染色體不能象脊椎動物染色體顯示G、R或Q帶?帶紋而不影響DNA序列(Fukui?k.，M.Minezawa，Y.Kamisugi，et?al.Microdissection?of?plant?chromosome?by?argon-ion?laser?beam[J].Theor?Appl?Genet.，1992，84：787-791)；通行的C帶，對染色體DNA破壞太大，不利于構建完整的DNA文庫；而有些植物染色體不僅小，而且大小差異不明顯，帶紋相似，難于精確識別染色體及其細微結構。所有這些都加大了分析的復雜性。?