[發明專利]一種NPTⅡ基因檢測用引物組、相應的試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 201210011411.1
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102559897A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 曹以誠;杜正平;陳洵;譚慧媚;熊槐;茅麗娜
• 申請（專利權）人: 廣州華峰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫

1.一種NPTII基因檢測用引物組，其特征在于，所述引物組以NPTII基因為靶基因、基于環介導等溫擴增技術設計，所述引物組由外引物F3、外引物B3、內引物FIP和內引物BIP組成，各引物的核苷酸序列分別為：

外引物F3(1)：

GCTGGATCGTTTCGCATGA

外引物B3(1)：

GCAGTTCATTCAGGGCACC

內引物FIP(1)：

GCCCAGTCATAGCCGAATAGCCTTTTGAACAAGATGGATTGCACGC

內引物BIP(1)：

GACAATCGGCTGCTCTGATGCCTTTTGGACAGGTCGGTCTTGACA

或

外引物F3(2)：

CTGTTCGCCAGGCTCAAG

外引物B3(2)：

CGCCAAGCTCTTCAGCAATA

內引物FIP(2)：

GAAAAGCGGCCATTTTCCACCATTTTGCGAGGATCTCGTCGTGA

內引物BIP(2)：

GGATTCATCGACTGTGGCCGGTTTTGGTAGCCAACGCTATGTCC。

2.一種檢測NPTII基因的試劑盒，其特征在于，所述檢測NPTII基因的試劑盒包括以NPTII基因為靶基因、基于環介導等溫擴增技術設計的兩對引物：內引物FIP/BIP和外引物F3/B3。

3.如權利要求2所述的檢測NPTII基因的試劑盒，其特征在于，所述的兩對引物的核苷酸序列分別為：

外引物F3(1)：

GCTGGATCGTTTCGCATGA

外引物B3(1)：

GCAGTTCATTCAGGGCACC

內引物FIP(1)：

GCCCAGTCATAGCCGAATAGCCTTTTGAACAAGATGGATTGCACGC

內引物BIP(1)：

GACAATCGGCTGCTCTGATGCCTTTTGGACAGGTCGGTCTTGACA

或

外引物F3(2)：

CTGTTCGCCAGGCTCAAG

外引物B3(2)：

CGCCAAGCTCTTCAGCAATA

內引物FIP(2)：

GAAAAGCGGCCATTTTCCACCATTTTGCGAGGATCTCGTCGTGA

內引物BIP(2)：

GGATTCATCGACTGTGGCCGGTTTTGGTAGCCAACGCTATGTCC。

4.如權利要求2所述的檢測NPTII基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括BstDNA聚合酶、反應液、穩定液、顯色液和陽性對照液。

5.如權利要求4所述的檢測NPTII基因的試劑盒，其特征在于，

所述的反應液為：每1L反應液含有1.6～2mmol?dNTP、20～25mmol?Tris-Cl、10～12.5mmol氯化鉀、10～12.5mmol硫酸銨、8～10mmol硫酸鎂、1～1.25mlTritonX-100、0.8～1mol甜菜堿、內引物FIP/BIP各1.6～2mol和外引物F3/B3各0.2～0.25mol；

所述的穩定液為石蠟油；

所述的顯色液為SYBR?Green?I或Eva?Green；

所述的陽性對照為NPTII基因DNA片段。

6.如權利要求5所述的檢測NPTII基因的試劑盒，其特征在于，所述的反應液為：每1L反應液中含有2mmol?dNTP、25mmol?Tris-Cl、12.5mmol氯化鉀、12.5mmol硫酸銨、10mmol硫酸鎂、1.25ml?TritonX-100、1mol甜菜堿、內引物FIP/BIP各2mol和外引物F3/B3各0.25mol。

7.如權利要求4、5或6所述的檢測NPTII基因的試劑盒，其特征在于，所述檢測NPTII基因的試劑盒還包括反應管，所述的反應管由管體和管蓋兩部分組成，管體內腔的下部設有將其分隔成A、B兩個空腔的縱向延伸的隔板。