[發明專利]同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法

無效

• 申請號: 201210011387.1
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN103207272A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 李健;王艷;陳沁;王權;陳政曉;蔣蔚
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局;上海大學;中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)分別制備醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的人工抗原；

(2)分別制備醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的單克隆抗體并純化；

(3)利用步驟(1)得到的人工抗原分別偶聯液相芯片熒光微球；

(4)利用步驟(2)得到的單克隆抗體進行生物素化；

(5)使用步驟(3)得到的偶聯的微球以及步驟(4)得到的生物素化的抗體，通過液相芯片法同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留。

2.根據權利要求1所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，醋酸甲羥孕酮的單克隆抗體的腹水效價為1∶2.56×10⁶。

3.根據權利要求1所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，己烯雌酚的單克隆抗體的腹水效價為1∶3.2×10⁶。

4.根據權利要求1所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中，己烯雌酚的雜交瘤細胞腹水效價為1∶1.6×10⁶。

5.根據權利要求1所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，步驟(5)中所述的檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留的步驟依次為：偶聯有MPA和DES的微球加入處理好的醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚樣品溶液，隨后加入生物素化的醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的抗體；然后加入稀釋好的SA-PE，最后加入終止液，檢測熒光強度。

6.根據權利要求5所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，包被好的微球一部分加入處理好的醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚樣品溶液，另一部分加入系列醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚標準溶液；標準溶液的濃度包括25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.6ng/mL、0.8ng/mL和0.4ng/mL。

7.根據權利要求5所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，所述的檢測熒光強度是通過Luminex?200儀器檢測熒光強度值，并用Luminex?version2.1軟件分析數據。

8.根據權利要求5所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，檢測醋酸甲羥孕酮的抗體稀釋度為1∶3000。

9.根據權利要求5所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，檢測己烯雌酚的抗體稀釋度為1∶6400。

10.根據權利要求5所述的同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的方法，其特征在于，SA-PE的稀釋度為1∶100。