[發明專利]檢測喹噁啉-2-羧酸殘留的免疫膠體金試紙及其制備方法

無效

• 申請號: 201210011290.0
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102590498A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 樂濤;賈渝躍;徐建;何紅秋;牛曉東
• 申請（專利權）人: 重慶市科學技術研究院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所 50211
• 代理人: 郭云

技術領域

本發明涉及一種獸藥殘留免疫化學快速檢測技術領域，具體涉及喹噁啉-2-羧酸(QCA)殘留的免疫膠體金試紙及其制備方法。?

背景技術

卡巴氧作為抗菌促生長劑，廣泛應用于畜禽養殖，能促進動物生長、提高飼料轉化率、預防和控制豬痢疾和細菌性腸炎。代謝研究和毒理學研究表明，卡巴氧在豬體內迅速轉化成脫一氧和脫二氧化合物，其原形和脫氧化合物對人和動物有一定的毒性作用，主要表現為誘癌性、致突變作用、繁殖毒性。因此，1999年歐盟禁止卡巴氧在食品動物中應用，2001年加拿大也頒布法令禁止卡巴氧在市面上銷售，2003年食品添加劑聯合專家委員會(JECFA)對卡巴氧進行了再評價，委員會決定對卡巴氧撤銷其最大殘留限量(MRLs)，該殘留限量由JECFA于1999年規定，肌肉和肝臟分別為5和30μg/kg。喹噁啉-2-羧酸是卡巴氧在豬體內最穩定的代謝產物，被歐盟法定為卡巴氧在豬食用組織中的殘留標識物。目前在動物性食品中喹噁啉-2-羧酸的分析檢測方法有很多，包括高效液相色譜法(HPLC)、液質連用(LC-MS)、氣質連用(GC-MS)和ELISA。儀器檢測主要存在儀器購置費用昂貴、樣品前處理復雜、程序繁瑣費時、檢測費用高、不能現場操作等缺陷，所以在生產中應用受到限制。ELISA方法靈敏度高、成本低，在藥物殘留檢測中應用也很廣泛，但該方法需要酶標儀等實驗室設備，?分析時間長，難于應用與現場應用等局限性。近年來，膠體金免疫層析技術(GICA)與目前普遍采用的標記免疫分析技術相比，具有簡便快速，特異性強、敏感性高，肉眼判斷，實驗結果易保存，無需特殊儀器設備等優點，因此GICA技術在藥物殘留檢測領域得到了廣泛應用。目前還沒有針對喹噁啉-2-羧酸殘留檢測的免疫膠體金試紙及其制備方法的專利和文獻報道。?

發明內容

為解決以上技術問題，本發明的目的之一在于提供一種能快速檢測、準確可靠檢測喹噁啉-2-羧酸殘留的免疫膠體金試紙?

本發明的的之二在于提供一種能快速檢測、準確可靠檢測喹噁啉-2-羧酸殘留的免疫膠體金試紙的制備方法。?

本發明目的之一是這樣實現的：一種檢測喹噁啉-2-羧酸藥物殘留的免疫膠體金試紙，包括背板(2)，該背板(2)上設置手控區、測試區和樣品端，所述測試區位于背板(2)中部，所述手控區和樣品端位于背板(2)兩個端部，其關鍵在于：所述手控區由吸水墊(3)和手控區封膜(1)組成，所述吸水墊(3)粘附在背板(2)，該吸水墊(3)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附手控區封膜(1)，所述測試區為粘附在背板(2)上的硝酸纖維素膜(4)，所述硝酸纖維素膜(4)上包被有羊抗兔IgG的質控線(5)和喹噁啉-2-羧酸-牛血清白蛋白偶聯物的檢測線(6)，所述樣品端由結合墊(7)、樣品墊(8)和樣品端封膜(9)組成，所述背板(2)上由測試區到外端依次粘附結合墊(7)和樣品墊(8)，該樣品墊(8)搭在結合墊(7)上，所述樣品墊(8)上表面及外端面和背板(2)外端面粘附樣品端封膜(9)。?

本發明目的之二是這樣實現的：檢測喹噁啉-2-羧酸藥物殘留的免疫膠體金?試紙的制備方法，其特征在于按如下步驟進行：?

步驟一：將半抗原喹噁啉-2-羧酸與牛血清白蛋白偶聯合成偶聯物免疫原，待用；?

步驟二：將步驟一中的偶聯物免疫原免疫兔，得到特異性抗兔抗喹噁啉-2-羧酸的多克隆抗體，將多克隆抗體加入膠體金中得到抗喹噁啉-2-羧酸多克隆抗體-膠體金標記物，將抗喹噁啉-2-羧酸多克隆抗體-膠體金標記物包被在結合墊(7)上；?

步驟三：將步驟一中的偶聯物免疫原包被在硝酸纖維素膜(4)得到檢測線檢測線(6)，將羊抗兔IgG包被在硝酸纖維素膜(4)得到質控線(5)；?

步驟四：將受控區封膜(1)，吸水墊(3)，硝酸纖維素膜(4)，結合墊(7)，樣品墊(8)和樣品端封膜(9)一次粘貼在背板上，得到檢測喹噁啉-2-羧酸藥物殘留的免疫膠體金試紙。?

本發明中的吸水墊、硝酸纖維素膜、結合墊、樣品墊等均購自Millipore公司。?