[發明專利]同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留的試劑盒

無效

• 申請號: 201210011272.2
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN103207275A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 李健;王艷;陳沁;王權;陳政曉;蔣蔚
• 申請（專利權）人: 上海出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢驗檢疫技術中心;上海大學;中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64;G01N33/74;G01N21/64
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一種液相芯片法同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的試劑盒。本發明還提供了同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留的方法和上述試劑盒的應用。

背景技術

醋酸甲羥孕酮(medroxyprogesterone?acetate，MPA)是一種孕激素類藥物，在獸藥中被作為促生長劑，廣泛用于安情助長和同步發情等方面以促進動物生長、提高飼料轉化率、節省成本、提高經濟效益，其對人具有廣泛的毒副作用，能引起精神抑郁、過敏等不良反應，甚至引起乳腺癌和不孕不育癥。歐盟成員國早已明令嚴禁在食源性動物飼養管理中使用，我國農業部2002年《動物性食品中獸藥最高殘留限量》文件中明文規定醋酸甲羥孕酮為禁止用于所有食品的動物獸藥，食品中不能檢出。己烯雌酚(diethylstilbestrol，DES)是一種非甾體激素，曾被廣泛用于促進動物生長、增加瘦肉率，其藥物原形或代謝產物不可避免地殘留于食品動物的器官、組織或通過排泄物進入外界環境，成為環境雌激素，具有導致畸胎、癌瘤等嚴重的毒負作用。美國食品藥物管理局(The?US?Food?and?Drug?Administration，FDA)早在1979年就已禁止己烯雌酚用于動物催肥。1989年，歐盟對一切含有促生長激素的動物和動物性食品實施封關禁入。

我國農業部2002年《動物性食品中獸藥最高殘留限量》文件中明文規定該藥為禁止用于所有食品的動物獸藥，食品中不能檢出。但是部分畜禽養殖戶盲目追求經濟效益、濫用DES的現象仍然存在。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種可同時檢測醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的試劑盒，該試劑盒不僅可以實現快速、大批量檢測，而且檢測特異性和靈敏度高，更重要的在于它的高通量。

本發明要解決的另一個技術問題是，提供一種可同時檢測水產品中MPA和DES殘留的方法。旨在解決獸藥殘留檢測單一、耗時、成本高等問題，也為進一步同時檢測四個獸藥殘留指標奠定了基礎。該方法的建立可滿足水產品中甲孕酮和己烯雌酚殘留檢測快速、準確的要求，同時，為我國水產品獸藥殘留的日常監控提供一種新的適用方法。

液相芯片技術(xMAP)是一種可廣泛應用于蛋白質、基因、受體/配體等多種生物反應的生物芯片技術平臺，主要包括微球、探針分子、被檢測物和報告分子四種成分。在微球的制造過程當中，摻入了兩種不同的紅色分類熒光，根據這兩種熒光的比例不同，把球形基質分為100種，可以標記上100種不同的探針分子，能同時對一個樣品中多達100種不同的目標分子進行檢測。反應過程中，探針和報告分子都分別與目標分子特異性結合。反應結束后，使單個的微球通過檢測通道，使用紅、綠雙色激光同時對微球上的紅色分類熒光和報告分子上的綠色報告熒光進行檢測，可確定所結合的檢測物的種類和數量。液相芯片技術的高靈敏度、高通量、檢測迅速等突出優點，對水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留進行檢測，并可用于獸藥殘留的日常監控中。實驗結果表明，通過調配微球、探針分子、被檢測物和報告分子四種成分的比例，以及熒光成分的種類和比例，可以檢測液體中的醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚。本發明在上述基礎上完成。

本發明提供了一種同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留的試劑盒，包括抗體。所述的抗體是針對醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的單克隆抗體。

所述的抗體的制備方法是以醋酸甲羥孕酮以及己烯雌酚分別與牛血清白蛋白的偶聯物作為免疫原，制備出單克隆抗體，并將之生物素化。

所述的試劑盒中的抗原為醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚分別與卵清白蛋白偶聯所得到的偶聯物，隨后分別與液相芯片熒光微球偶聯。

所述的試劑盒還包括SA-PE溶液和終止液。還可以包括微球稀釋液。

所述的試劑盒還包括醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚的標準品溶液。

所述的標準品溶液的濃度包括25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.6ng/mL、0.8ng/mL和0.4ng/mL。

本發明還提供了上述試劑盒的應用，即利用該試劑盒同時檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留，包括以下步驟：

前處理待測樣品；

用上述試劑盒檢測樣品。

所述的檢測水產品中醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚殘留的步驟依次為：偶聯有MPA和DES的微球加入處理好的醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚樣品溶液，隨后分別加入生物素化的醋酸甲羥孕酮和己烯雌酚抗體；然后加入稀釋好的SA-PE，最后加入終止液，檢測熒光強度。