[發(fā)明專利]一種壁虎抗癌提取物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210010851.5
• 申請日: 2012-01-14
• 公開（公告）號: CN102688475A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王建剛;宋瑩;崔朝初;段冷昕;李瑞芳
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: A61K38/00
• 分類號: A61K38/00;A61K35/56;A61K9/19;A61P35/00
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種壁虎抗癌提取物。

背景技術(shù)

壁虎是我國傳統(tǒng)的治療腫瘤的中藥材。大量的臨床報道顯示，壁虎治療惡性腫瘤效果顯著，干、鮮壁虎、含壁虎的血清、壁虎復(fù)方制劑、壁虎蛋白酶水解液等對腫瘤均有較好的療效。謝爽、王學(xué)美等(謝爽，王學(xué)美，謝東澤.鮮壁虎提取物抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞增值和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究.腫瘤防治研究，2003，30：458-461)用不同濃度的鮮壁虎提取液(取活體無蹼壁虎冷凍處死，清水洗凈，粉碎勻漿，凍融10次，自然沉淀取上清，低溫離心10000r/min，離心20min，取上清)對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行研究，結(jié)果鮮壁虎提取液在64mg/L、128mg/L、256mg/L濃度時，可以顯著抑制C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長，且有明顯的量-效關(guān)系。楊麗華、王學(xué)美等(楊麗華，楊金霞，王學(xué)美等.壁虎多糖對鼠源肝癌H22體內(nèi)外作用研究.天津中醫(yī)藥，2008，25：494-496)進(jìn)行了壁虎多糖對鼠源肝癌H22體內(nèi)外作用研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)壁虎多糖在體外作用很強(qiáng)，但對體內(nèi)移植瘤無作用，因此對壁虎多糖的抗腫瘤作用提出了質(zhì)疑。李耀輝、耿秀芳等(李耀輝，盛繼文，耿秀芳等.無蹼壁虎藥用成分抗腫瘤效果.陜西中醫(yī)，2009，30：899-901)把鮮壁虎置入酒精致死，搗碎勻漿，乙醇溶液浸泡，蒸發(fā)除乙醇，再除脂類，得到水提物，最后冷凍干燥，得到干燥物。然后該干燥物以乙醇溶解，經(jīng)Al₂O₃柱層析，得到15個層析藥物樣品。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，這些樣品中的第3到第9部分有抑制HepG-2的作用，其余部分作用不明顯。而李耀輝等(李耀輝，劉冬梅，盛繼文等.無蹼壁虎抗腫瘤成分的提取及其對CT-26小鼠結(jié)腸腺癌的抑制作用.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2009，30：1103-1106)在無蹼壁虎抗腫瘤成分的提取及其對CT-26小鼠結(jié)腸腺癌的研究中，報道有19個層析成分，其中第11到第19個樣品無作用，第1到第10樣品均有一定的抗腫瘤作用其中第1到第6樣品作用最強(qiáng)。康建功、李耀輝等(康建功，張仕狀，李耀輝等.鮮無蹼壁虎抗腫瘤活性成分抑制CT-26腫瘤細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)研究.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27：441-444)還比較了鮮壁虎活性成分及其脂質(zhì)體對CT-26的作用，發(fā)現(xiàn)活性成分脂質(zhì)體在體內(nèi)的作用較強(qiáng)。

上述大量的研究結(jié)果表明，壁虎提取物具有肯定的抗腫瘤作用，并且在實(shí)體瘤治療方面有良好的應(yīng)用前景，但目前的壁虎提取物的提取方法較為復(fù)雜，而且壁虎提取物對腫瘤的抑瘤效果很難達(dá)到氟尿嘧啶和阿霉素的抑瘤水平。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抑瘤效果好的壁虎抗癌提取物。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種壁虎抗癌提取物，其采用如下方法提取而成：

1)將壁虎清洗、晾干，破碎成粉末，置于pH為7.4的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸的緩沖溶液中，浸泡12小時；

2)浸泡后破碎，離心取上清液加入無水乙醇至乙醇終濃度為55％進(jìn)行提取，然后離心取上清液即得壁虎醇提液；

3)將壁虎醇提液蒸發(fā)濃縮，加入硫酸銨至其濃度為25％，調(diào)整pH至7，4℃靜置3～4小時，每隔30min攪拌一次，然后離心取上清得上清液；將得到的上清液加入硫酸銨至其濃度為50％，調(diào)整PH至4.6，4℃靜置3～4小時，每隔30min攪拌一次，然后離心得到沉淀；

4)將沉淀裝入截留分子量為3.5KDa透析袋中，將透析袋置于0℃蒸餾水中進(jìn)行透析，直至透析袋中出現(xiàn)白色絮狀物；

5)取出透析袋將白色絮狀物進(jìn)行真空冷凍干燥，得到壁虎抗癌提取物。

步驟2)和步驟3)中所述離心為7000g離心20分鐘。

步驟2)所述破碎為超聲細(xì)胞破碎、膠體磨勻漿。

步驟2)所述加入無水乙醇后，于4℃靜置3～4小時，每隔30分鐘攪拌一次。

步驟3)所述調(diào)整pH采用的是鹽酸。

本發(fā)明的壁虎抗癌提取物，采用醇提、鹽析、透析的方法，從壁虎中提取出具有抗腫瘤作用的多肽分子，使提取物具有很強(qiáng)的抗腫瘤效果，可以作為高效、低毒的抗腫瘤新藥物的活性成分。經(jīng)過試驗(yàn)證明本發(fā)明的壁虎抗癌提取物具有很好的抗癌作用，達(dá)到了常規(guī)抗癌藥物氟尿嘧啶和阿霉素的抗癌水平，可以提高機(jī)體的免疫力，而且壁虎提取物中含有天然的壁虎多肽，具有毒性低、副作用小的優(yōu)點(diǎn)。另外本發(fā)明的制備方法簡單，易于推廣應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例

1、壁虎晾干與粉碎：把清洗過的干無蹼壁虎1000g晾干后，用粉碎機(jī)粉碎為粗粉。