[發明專利]一種植物雙元表達載體

有效

• 申請號: 201210010807.4
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN103205456A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 李付廣;尹國;洪偉東;張朝軍;張雪妍
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種植物雙元表達載體，是按照如下方法得到：在出發載體pBI121中構建熒光蛋白報告基因表達盒和外源基因表達盒；所述外源基因表達盒由啟動子、內含子和終止子依次連接而成，所述啟動子與所述內含子之間具有若干個酶切位點，所述內含子與所述終止子之間具有若干個酶切位點；構建得到的植物雙元表達載體中其它位置的酶切位點與所述內含子兩側的酶切位點均不相同。

2.根據權利要求1所述的植物雙元表達載體，其特征在于：所述啟動子與所述內含子間的若干個酶切位點為：Xba?I、Age?I、Kpn?I、AvrII和BamH?I，所述內含子與所述終止子之間的若干個酶切位點為：EcoR?I、Sac?I、Sal?I和SnaB?I。

3.根據權利要求2所述的植物雙元表達載體，其特征在于：所述外源基因表達盒的核苷酸序列如序列4所示。

4.根據權利要求1或2所述的植物雙元表達載體，其特征在于：所述構建熒光蛋白報告基因的表達盒的方法為用熒光蛋白報告基因替換所述出發載體pBI121中的GUS基因表達盒中的GUS基因，得到所述熒光蛋白報告基因的表達盒。

5.根據權利要求4所述的植物雙元表達載體，其特征在于：所述熒光蛋白報告基因的為EGFP報告基因。

6.根據權利要求1或2所述的植物雙元表達載體，其特征在于：所述外源基因表達盒的表達方向與所述熒光蛋白報告基因的表達盒的表達方向相反。

7.權利要求1-6中任一所述植物雙元表達載體在將目的基因導入出發植物中的應用。

8.權利要求1-6中任一所述植物雙元表達載體在使出發植物中的目的基因功能喪失中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述使出發植物中的目的基因功能喪失是通過RNA干擾實現的。

10.根據權利要求7、8或9所述的應用，其特征在于：所述出發植物為雙子葉植物或單子葉植物；所述雙子葉植物具體為煙草或棉花；所述單子葉植物具體為洋蔥。