[發(fā)明專利]可用于誘導肝細胞損傷的RNA干擾靶點

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210010355.X
• 申請日: 2012-01-13
• 公開（公告）號: CN102604938A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設計）人: 程通;張雅麗;王瑋;王騰云;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學;廈門萬泰滄海生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/113;C12N15/63;C12N5/10;A61K48/00;A01K67/027
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.靶向FAH的RNA干擾靶點，其序列選自：

(1)SEQ?ID?NO：1-5中任何一個所示的序列，或者

(2)在嚴緊條件或者高度嚴緊條件下與(1)中序列能夠雜交的核苷酸序列，或者

(3)與(1)中序列僅有1個核苷酸不同的序列；或者

(4)上述序列的互補序列。

2.包含權(quán)利要求1的RNA干擾靶點的核酸構(gòu)建體。

3.包含權(quán)利要求1的RNA干擾靶點的載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的RNA干擾靶點獲得的、能夠抑制FAH基因的表達的siRNA。

5.一種重組表達載體，其可表達權(quán)利要求4的siRNA。

6.權(quán)利要求5的重組表達載體，其包含靶向FAH的siRNA的編碼核酸序列，所述編碼核酸序列與表達控制序列可操作地連接，使得可在細胞中表達所述的siRNA。

7.權(quán)利要求6的重組表達載體，其中所述細胞是動物細胞，例如哺乳動物細胞。

8.權(quán)利要求5的重組表達載體，其是質(zhì)粒載體或病毒載體。

9.權(quán)利要求8的重組表達載體，其中所述病毒載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。

10.權(quán)利要求9的重組表達載體，其中所述逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是慢病毒載體。

11.轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導了權(quán)利要求5-10任一項的重組表達載體的分離的細胞。

12.一種改造的分離的細胞，其可表達或包含有權(quán)利要求4的siRNA。

13.權(quán)利要求12的改造的細胞，其在基因組中或者基因組外攜帶權(quán)利要求1所述的RNA干擾靶點的編碼核酸序列，所述編碼核酸序列與表達控制序列可操作地連接，使得可在該細胞中表達所述siRNA。

14.權(quán)利要求13的改造的細胞，其中所述細胞是動物細胞，例如哺乳動物細胞。

15.制備權(quán)利要求11-14任一項的細胞的方法，其包括用權(quán)利要求5-12的重組表達載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導細胞。

16.DNA的組合，其包括編碼正義RNA片段的第一DNA序列和編碼反義RNA片段的第二DNA序列，或者由編碼正義RNA片段的第一DNA序列和編碼反義RNA片段的第二DNA序列組成，所述正義RNA片段的靶序列為權(quán)利要求1的RNA干擾靶點所編碼的RNA序列，反義RNA片段和正義RNA片段能形成雙鏈RNA，該雙鏈RNA能抑制FAH基因的表達。

17.小干擾RNA(siRNA)，其包括正義RNA片段和反義RNA片段，所述正義RNA片段的靶序列為權(quán)利要求1的RNA干擾靶點編碼的RNA序列，反義RNA片段和正義RNA片段能形成雙鏈RNA，且該雙鏈RNA能抑制FAH基因的表達。

18.權(quán)利要求4的siRNA、或權(quán)利要求5-10任一項的重組表達載體、或權(quán)利要求11-14任一項的細胞、或權(quán)利要求16的DNA的組合、或權(quán)利要求17的siRNA在制備藥物或組合物中的用途，所述藥物或組合物可用于抑制FAH基因的表達、或誘導肝細胞損傷或產(chǎn)生肝臟損傷的小鼠。

19.誘導小鼠肝臟損傷的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求4的siRNA或權(quán)利要求5-10任一項的重組表達載體或權(quán)利要求16的DNA的組合或權(quán)利要求17的siRNA導入小鼠體內(nèi)。

20.抑制FAH基因的表達的方法，其包括將有效量的權(quán)利要求4的siRNA或權(quán)利要求5-10任一項的重組表達載體或權(quán)利要求16的DNA的組合或權(quán)利要求17的siRNA導入細胞。