[發明專利]海綿共附生土曲霉及制備(+)-terrein的用途

有效

• 申請號: 201210007947.6
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102827777A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 殷穎;李志勇;張風麗;孫偉;余智生;丁博
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P7/38;C12R1/66
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種綿共附生土曲霉及制備(+)-terrein的用途。

背景技術

土曲霉已被廣泛應用于降脂藥物洛伐他汀以及化工原料衣康酸的生產，但尚未被用于(+)-terrein的生產。(+)-terrein是一種環戊烯酮類化合物，結構如圖1所示，最初即從土曲霉發酵液中分離得到，近年來，人們發現(+)-terrein的活性十分多樣，不僅具有抗細菌、真菌、雜草的活性，還可以抑制腫瘤細胞血管新生素的分泌，抑制黑色素合成，抑制皮膚角質增生，抑制牙髓細胞炎癥反應，促進成骨細胞與鈦支架融合等。可以預見(+)-terrein將來在醫療、美容、農業等眾多領域會有良好的應用前景。

化學合成制備(+)-terrein的技術往往有總產率不高，且需要采用高溫高壓等極端反應條件，需要昂貴的反應試劑，或是終產物不具備立體結構的選擇性。而目前采用微生物發酵制備(+)-terrein的產量又十分有限，少則數百μg/L(Phattanawasin?P，et?al.Weed?growth?inhibitors?from?Aspergillus?fischeri?TISTR?3272.Natural?Product?Research?2007；21：1286-1291)，多則數百mg/L(M.Demasi，et?al.Studies?on(+)-terrein?as?a?New?Class?of?Proteasome?Inhibitors.Journal?of?the?Brazilian?Chemical?Society?2010；21：229-305)，而未能達到具備生產價值的g/L量級。

發明內容

本發明的目的在于提供一種海綿共附生土曲霉及制備(+)-terrein的用途。本發明的海綿共附生土曲霉分離自中國南海永興島Phakellia?fusca海綿，其(+)-terrein產量相較于現有其他菌株有較大提高，可達到3.71g/L。

本發明是通過以下的技術方案實現的：

本發明的海綿共附生土曲霉菌株為土曲霉(Aspergillus?terreus)PF26已經于2011年8月31日遞交中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?NO.5208。

該微生物經分子生物學18S及ITS?rDNA基因序列分析，結合形態學觀察，確定其分類學地位屬于曲霉屬(Aspergillus)的土曲霉(Aspergillus?terreus)，菌株編號為PF26。

所述的18S?rDNA基因序列已提交GenBank，序列號為JN831364，最相似序列為土曲霉序列GU227345，最大相似度為99％，以18S?rDNA基因序列同源性為基礎構建形成包括菌株PF26在內的相關真菌系統發育樹如圖2所示。

所述的ITS?rDNA基因序列已提交GenBank，序列號為JN831365，最相似序列為土曲霉序列JN194186，最大相似度為100％，以ITS?rDNA基因序列同源性為基礎構建形成包括菌株PF26在內的相關真菌系統發育樹如圖3所示。

18S?rDNA基因與ITS?rDNA基因的鑒定結果吻合，最相似序列均為土曲霉序列，且在兩個系統發育樹上PF26的序列也均與土曲霉序列聚類在一起，因此通過分子生物學的鑒定可以說明PF26是一株土曲霉。

本發明還涉及上述的海綿共附生土曲霉菌株在制備化合物(+)-terrein中的用途。

優選的，所述制備包括將海綿共附生土曲霉菌株進行發酵的步驟。

優選的，所述發酵具體為：將發酵培養基于115℃滅菌30min；將土曲霉PF26的孢子接入滅菌后的所述發酵培養基中，接種量為4×10⁶個孢子/mL，于28℃，180rpm的搖床培養24天。

優選的，所述發酵培養基的配置方法包括如下步驟：取葡萄糖28.41g、麥芽糖23.18g、甘露醇20.00g、麥芽提取物8.52g、谷氨酸鈉10.00g、氯化銨10.00g，之后溶于1L人工海水中，即得所述發酵培養基。

優選的，所述人工海水的配置方法包括如下步驟：將26.518g氯化鈉、2.447g氯化鎂、3.305g硫酸鎂、1.141g氯化鈣、0.725g氯化鉀、0.202g碳酸氫鈉以及0.083g溴化鈉溶解于1L蒸餾水中，即得，所述配制好的人工海水的pH值為7.0～7.2。