[發明專利]一種羅非魚精子通用稀釋液及制備方法

無效

• 申請號: 201210007383.6
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102578076A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 柳凌;鄒桂偉;張濤;梁宏偉;張潔明;李忠;郭峰
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

技術領域

本發明涉及羅非魚品種的精子技術領域，更具體涉及一種羅非魚精子通用稀釋液，同時還涉及一種羅非魚精子通用稀釋液的制備方法，適合所有羅非魚品種的精子。

背景技術

羅非魚(Tilapia)為一種中小型魚，被譽為未來動物性蛋白質的主要來源之一。原產于非洲，上世紀70年代被引進到我國，目前已成為我國一個重要的水產養殖品種。隨著我國對羅非魚品種的選育和改良，除最初引進的尼羅羅非魚(O.niloticus)和奧尼亞羅非魚(O.aureus)外，又培育了許多新的品種。如：尼羅羅非魚和奧尼亞羅非魚的雜交后代奧尼羅非魚；通過3系雜交選育的后代尼羅超雄魚；以及由8個品系的尼羅羅非魚經雜交混合選育的吉富羅非魚等。

為了能進一步開展羅非魚的新品種選育，以及羅非魚的人工繁殖，為市場提供更優質的羅非魚新品種和苗種，需要進行羅非魚精子超低溫保存和人工繁殖。然而，無論是精子的超低溫保存，還是進行人工繁殖，都需要一種稀釋液對羅非魚精子進行稀釋。這是因為羅非魚精液中所含精子的密度很高，一般可以達到1.4～1.8×10⁹個/ml。當對羅非魚精子進行超低溫保存時，含高密度精子的精原液是不能直接進行超低溫冷凍保存的。這是因為在冷凍過程中，當溫度降到0℃～-20℃區間時，被保存的精液中會形成冰晶，冰晶像鋒利的刀一樣刺向四周的精子，將精子刺破。精液中的精子密度越高，精子被刺破的概率也越高。這種在冷凍過程中冰晶對精子的物理損傷將直接導致精子超低溫冷凍保存的失敗。因此，冷凍前必須要對精子進行稀釋，這就需要有一種適合羅非魚精子的精子稀釋液。而在進行羅非魚人工繁殖時，由于精液中含精子的密度很高，如果直接用來進行人工授精，不僅對非常寶貴的精液是一種浪費，而且，因為精子密度過高，精液的黏稠度增加，使精子不易與卵子混合均勻，從而導致授精效果也不好。如果對精液進行稀釋后，再用來進行人工授精，可大大降低人工授精的成本，同時還能起到很好的授精效果，獲得較高的受精率。因此，羅非魚精子稀釋液的作用就是在不激活精子的前提下，對精子進行稀釋，使精子盡可能的保持其原有的生物學特性。

然而，精子稀釋液是有一定要求的。每種魚類的精子都有自己一定的滲透壓，不同種魚類的滲透壓是不同的。魚類的精子在未遇見水或其它溶液前始終處在休眠狀態，淡水魚類只有在遇見低于自己滲透壓的溶液或淡水時才能被激活，而海水魚類則要遇見高于自己滲透壓的溶液或海水時才能被激活。精子一旦被激活，很快會衰減死亡。精子的壽命一般很短，短的只有幾十秒，長的也就幾十分鐘。要想對精子進行稀釋，首先要保證精子在稀釋液中不會被激活。這就要求每種魚的精子稀釋液必須與這種魚的精液滲透壓盡可能的相等。稀釋液的滲透壓是由稀釋液中的離子濃度總和決定的，不同濃度的稀釋液就有不同的滲透壓，調節稀釋液中的離子濃度就能調節這種稀釋液的滲透壓，從而達到與精液等滲的效果。除此之外，稀釋液中不同的離子成分對精子又有不同的作用。如：稀釋液中的Na離子主要是起調節稀釋液滲透壓的作用；K離子起著改變精子膜表面通透性的作用；Ca、Mg離子則起著增加或降低精子運動速度的作用；而CO₃離子則起著調節稀釋液pH的作用等。除此之外，有報道顯示葡萄糖等大分子類溶質除了起到調節滲透壓的作用外，還具有提供精子能量的作用。因此，不同的魚不僅稀釋液濃度完全不同，而且，根據精子的生物學特性，其離子成分也會有很大差異。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種羅非魚精子通用稀釋液，配方合理，使用方便，適合各種羅非魚品種精子的稀釋，是羅非魚精子超低溫保存和進行人工授精所必須的一種溶液。在羅非魚精子超低溫保存過程中，可確保精子不會被激活，并最大限度降低冰晶對精子的損傷。在進行羅非魚人工授精過程中，可有效稀釋精子，降低人工授精成本，提高受精率。

本發明的另一個目的是在于提供了一種羅非魚精子通用稀釋液制備方法，方法易行，操作簡便，適合配制各種體積的稀釋液，可確保所配制稀釋液中個組分濃度的準確性。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

一種羅非魚精子通用稀釋液，它由以下重量份的原料制成：

稀釋液滲透壓為265.4～320.6mOsM，pH為8-9。

一種羅非魚精子通用稀釋液，它由以下重量份的原料制成(較好范圍)：

稀釋液滲透壓為273.0～314.2mOsM，pH為8.1-8.8。

一種羅非魚精子通用稀釋液，它由以下重量份的原料制成(優選范圍)：