[發明專利]輔助診斷結核病患者的試劑盒

有效

• 申請號: 201210006897.X
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN102590502A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 車南穎;李傳友;張旭霞
• 申請（專利權）人: 北京市結核病胸部腫瘤研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種輔助診斷結核病患者的試劑盒。

背景技術

結核病是嚴重威脅人類健康的傳染性疾病，全球有1/3的人口感染了結核分枝桿菌(Mycobacterium?tuberculosis，MTB)，每年有200萬人死于結核病，其死亡率在傳染性疾病中僅低于艾滋病排第二。

結核病的治療周期很長，一般在6個月以上，而且抗結核化療過程經常出現藥物副作用，使得患者依從性不容樂觀。尤其，治療期間病情進展以及治療后治愈狀態的評估沒有很好的指標。目前臨床常用的細菌學及影像學檢查方法存在很多缺點。細菌學檢查最常見的痰涂片和痰培養敏感性在50％左右，如果患者不排菌或排菌量少，就很難作為可信性指標。而且痰培養一般都在1個月后才能出結果，所以不能及時反映患者病情轉歸狀態。而影像學檢查結果受主觀性因素影響比較大，不同醫生、不同醫院診斷結果差異較大。如果對病情進展的判斷出現偏差，不僅延誤治療，還會增加耐多藥患者出現的可能性。因此，結核病治療急需一種能客觀準確反映結核病轉歸以及治療效果的新型指標。

發明內容

本發明的目的是提供一種輔助診斷結核病患者的試劑盒。

本發明提供的輔助診斷結核病患者的試劑盒，包括結核分枝桿菌總蛋白和用于檢測白細胞介素-8的物質。

所述結核分枝桿菌總蛋白是將結核分枝桿菌進行總蛋白提取得到的。所述結核分枝桿菌總蛋白可按如下方法制備：將結核分枝桿菌破碎菌體并收集上清液，然后用0.22μm無菌濾器進行過濾，獲得無菌的結核分枝桿菌總蛋白溶液。所述結核分枝桿菌總蛋白具體可按如下方法制備：取100mL?OD₆₀₀＝1的結核分枝桿菌菌液，4℃、3000g離心10min，收集菌體，洗滌后用1mL?4℃預冷的PBS緩沖液重懸；然后加入0.1mm二氧化硅珠子，在FastPrep-24儀器上以6.5m/s(米/秒)的振蕩速度破碎1分鐘，4℃、10000g離心10min，取上清液；將上清液用0.22μm無菌濾器進行過濾，獲得無菌的結核分枝桿菌總蛋白溶液。

所述結核分枝桿菌具體可為H37Rv標準株。

所述用于檢測白細胞介素-8的物質為白細胞介素-8的抗體，如單克隆抗體或多克隆抗體，也可直接商購用于檢測白細胞介素-8的試劑盒。

所述試劑盒的使用方法如下：取1mL待測患者的外周血于細胞培養板，加入10μL結核分枝桿菌總蛋白標準液，混勻，在37℃、5％CO₂條件下放置24h；然后將血液樣品全部轉移至新的1.5mL離心管，室溫下3000rpm離心10分鐘，收集上清液，用PBS緩沖液稀釋至200倍體積，作為待測溶液，檢測其中的白細胞介素-8含量。所述結核分枝桿菌總蛋白標準液的具體制備方法如下：將無菌的結核分枝桿菌總蛋白溶液用無菌PBS緩沖液稀釋至蛋白濃度為1mg/mL，即為結核分枝桿菌總蛋白標準液。

所述輔助診斷結核病患者具體指的是輔助診斷結核病患者是否治愈、輔助診斷待測患者是否為結核病患者或輔助診斷結核病患者的嚴重程度(如細菌載荷量和肺部病理損傷程度)。

本發明還保護以上任一所述結核分枝桿菌總蛋白和用于檢測白細胞介素-8的物質在制備輔助診斷結核病患者的試劑盒中的應用。所述結核分枝桿菌具體可為H37Rv標準株。所述用于檢測白細胞介素-8的物質為白細胞介素-8的抗體，如單克隆抗體或多克隆抗體，也可直接商購用于檢測白細胞介素-8的試劑盒。所述輔助診斷結核病患者具體指的是輔助診斷結核病患者是否治愈、輔助診斷待測患者是否為結核病患者或輔助診斷結核病患者的嚴重程度(如細菌載荷量和肺部病理損傷程度)。

本發明還保護一種輔助診斷結核病患者的試劑盒，包括結核分枝桿菌和用于檢測白細胞介素-8的物質。

所述結核分枝桿菌具體可為H37Rv標準株。

所述用于檢測白細胞介素-8的物質為白細胞介素-8的抗體，如單克隆抗體或多克隆抗體，也可直接商購用于檢測白細胞介素-8的試劑盒。