[發明專利]一種獸用高效復合微生態預混劑的制備方法

無效

• 申請號: 201210006876.8
• 申請日: 2012-01-11
• 公開（公告）號: CN103202393A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 趙志毅;胥勇;溫亮
• 申請（專利權）人: 四川省環亞生物科技有限公司
• 主分類號: A23K1/18
• 分類號: A23K1/18;A23K1/16;C12N1/20;C12N1/18;C12N1/16;C12R1/10;C12R1/125;C12R1/72;C12R1/865
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 趙麗

技術領域

本發明涉及一種微生態預混劑的制備方法，更具體地說涉及一種獸用高效復合微生態預混劑的制備方法，屬于微生態制劑飼料添加劑技術領域。

背景技術

獸用微生態預混劑是一種天然、綠色、安全的飼料添加劑，由于其具有無毒、無害、無殘留、無污染等優點，同時具有防病治病，提高飼料利用率，提高動物生產性能等作用，而且能克服抗生素所產生的菌群失調、二重感染和耐藥性等，在動物源性食品安全問題日益突出的情況下越來越得到廣泛研究和應用。

目前，國內市場上的獸用微生態預混劑產品主要存在以下不足：（1）活菌含量低，近年大量研究表明，如果一種菌在動物盲腸內容物中的濃度低于10⁷個/g，則該菌產生的酶及代謝產物不足以影響宿主，難以滿足治療需要；（2）對胃酸和膽汁穩定性差，致使只有少數菌株進入腸道后仍具有活性，達不到發揮作用所需的活菌數量；（3）體內增殖速度差；（4）不耐高銅，高溫加工和貯存過程中不穩定，保存期短；（5）復合預混劑少，僅適應某一特定動物。由此影響了微生態預混劑在動物上的應用效果，限制了微生態預混劑的應用范圍。

發明內容

本發明的目的在于提供一種活菌含量高、耐胃酸和膽汁、對高銅和高溫有耐受性、體內增殖速度穩定、保存期長的獸用高效微生態預混劑及其制備方法。

本發明的目的是通過下述技術方案予以實現：

一種獸用高效復合微生態預混劑的制備方法，包括以下步驟：

1）菌種優化篩選

將地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、產朊假絲酵母、釀酒酵母分別進行菌株耐酸、耐膽汁鹽、耐溫、耐高銅馴化；

所述耐酸馴化是指：pH?3.2-3.6的條件下篩選出耐酸菌株；

所述耐膽鹽馴化是指：在培養基中加入膽鹽后，再對篩選出的耐酸菌株進行馴化；

所述耐溫馴化是指：將經耐膽鹽馴化后的菌體培養物接種至LB、TB液體培養基中，然后在40-60℃水浴中加熱，隨后繼續將培養物置于37℃培養；

所述耐高銅馴化是指：將經耐溫馴化后的菌體在含200-250mg/kg銅的MRS肉湯培養基中進行生長；

2）選取復壯菌種

選取地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌的第四代活化菌種作為復壯菌種，產朊假絲酵母、釀酒酵母選第三代活化菌種作為復壯菌種；

3）搖瓶培養

所述四種復壯菌種再分別采用下列相應的培養基，在搖瓶中進行培養：

①地衣芽孢桿菌培養：培養基組成為葡萄糖18-20g/L、豆餅粉60-70g/L、玉米漿6.5-7.0g/L、蛋白胨1.3-1.5g/L，pH值為7.2-7.5，培養溫度為33-37℃；

②枯草芽孢桿菌培養：培養基組成為葡萄糖32-35g/L、蛋白胨7.5-8.3g/L、酵母膏4.5-5.0g/L、KH₂PO_4?3.0-3.5g/L、CaCO_3?2.0-2.5g/L，pH值為6.5-7.1，培養溫度為32-34℃；

③產朊假絲酵母培養：培養基組成為葡萄糖35-40g/L、蛋白胨10-12g/L、KH₂PO_4?1.8-2.0g/L、MgSO₄·7H₂O?0.25-0.30g/L，培養溫度為25-28℃；

④釀酒酵母培養：培養基組成為酪蛋白胨13-16g/L、酵母粉12-15g/L、葡萄糖25-30g/L、KH₂PO_4?2.2-2.4g/L、K₂HPO_4?·3H₂O?15-16.34g/L，培養溫度為26-30℃；

4）30L發酵罐培養

依照步驟3)的培養條件，將經搖瓶培養后的菌種分別放入30L發酵罐中擴大培養；

5）菌體噴霧干燥

分別連續離心收集菌體，將菌泥用保護液和載體調配至固形物濃度3-5%，再于28-35℃的溫度下進行噴霧干燥，分別收集單一菌粉；

所述保護液由脫脂乳粉、半胱氨酸、谷氨酸鈉組成，其含量分別為：脫脂乳粉80-85g/L、半胱氨酸0.04-0.05mol/L、谷氨酸鈉25-30g/L；

所述載體選自80-100目的玉米芯粉或80-100目的球磨糠粉，或者是二者以任意重量比的混合物；