[發明專利]青蒿AaORA蛋白及編碼基因、轉基因青蒿植株的獲得方法有效

申請號：	201210006769.5	申請日：	2012-01-11
公開（公告）號：	CN102558325A	公開（公告）日：	2012-07-11
發明（設計）人：	唐克軒;陸續;江偉民;張凌;張利達;張芳源;沈乾;呂宗友;高爾娣	申請（專利權）人：	上海交通大學
主分類號：	C07K14/415	分類號：	C07K14/415;C12N15/29;C12N15/84;C12N1/21;A01H5/00;C12R1/01
代理公司：	上海漢聲知識產權代理有限公司 31236	代理人：	郭國中
地址：	200240 ***	國省代碼：	上海;31
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	青蒿 aaora 蛋白編碼基因轉基因植株獲得方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明涉及的是一種基因工程技術領域的蛋白，具體涉及一種青蒿AaORA蛋白及編碼基因、轉基因青蒿植株的獲得方法。

背景技術

植物新陳代謝分為初生代謝和次生代謝，初生代謝產物(如糖類、脂類和核酸)存在于所有植物中，是維持細胞生命活動所必需的，而植物次生代謝產物是指植物中一大類并非植物生長發育所必需的小分子有機化合物，其產生和分布具有種屬、組織器官和生長發育特異性。近年來，隨著對中草藥成分研究的逐步深入，發現很多中草藥的有效成分均為植物的次生代謝產物，如青蒿中的青蒿素，紫草中的紫草素等，具有重要的藥用價值。

天然植株中次生代謝產物含量極低，而使用化學合成的方法，工藝流程復雜、成本高。因此，人們開始探索其他的提高植物次生代謝產物含量的方法，在諸多方法之中，植物代謝工程和代謝調控是提高植物次生代謝產物含量的最有效方法之一。植物代謝途徑大多是由多種酶參與的多步反應，受發育、環境等因素的影響，對單個基因進行修飾有時難以奏效。而轉錄調控因子可調控多個參與代謝途徑基因的表達，其在植物發育、適應、進化中的作用研究已取得了不少進展。轉錄因子通常指由核基因編碼的一類蛋白質，它們主要以同源或異源二聚體的形式同順式作用因子發生特異性的結合，通過和某些輔助調控子發生作用而影響轉錄復合體的形成，從而調節植物基因的特異性表達。改變轉錄因子的表達往往可導致植物中該轉錄因子所控制性狀的較大改變，因此，利用基因工程的方法調控轉錄因子是頗具應用價值的植物遺傳操作手段。

荷蘭Memelink實驗室在長春花中所做的研究取得重要進展，他們所發現的ORCA2和ORCA3轉錄因子是目前所知在植物次生代謝調控中具有重要作用的轉錄因子，且都屬于AP2/ERF家族，是植物特有的一類轉錄因子。該家族轉錄因子參與植物多種基因的表達，能調節植物對病原、低溫、干旱及高鹽等分子的應答反應，提高植物對逆境脅迫的耐受作用。ORCA3應答于MeJA的誘導，可以增強TIAs生物合成代謝途徑上多個基因，包括dxs、as、tdc、str、d4h的表達。ORCA3不影響催化開聯番木鱉甙生物合成第一步的酶--香葉醇單加氧酶(G10H)，盡管G10H也受甲基茉莉酸調控。在僅過表達ORCA3的轉基因細胞系中生物堿含量并沒有增加。如果在細胞培養介質中加入一定量的開聯番木鱉甙的前體馬錢苷后，轉ORCA3基因的細胞系生物堿合成比非轉基因對照細胞系高3倍。如果通過RACE等技術在青蒿中克隆并得到類似長春花中的ORCA2和ORCA3轉錄因子，那么就可以利用其對次生代謝的重要調控作用，使用代謝工程手段提高青蒿植株中重要次生代謝產物青蒿素的含量。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的不足，提供一種青蒿AaORA蛋白及編碼基因、轉基因青蒿植株的獲得方法。該基因編碼一個乙烯相應的AP2-ERF類轉錄因子(AaORA)，它參與調控青蒿素的合成代謝途徑；利用轉基因技術將青蒿AaORA轉錄因子干擾載體轉化青蒿可以有效調控青蒿中青蒿素的含量。

本發明是通過以下技術方案實現的：

第一方面，本發明涉及一種青蒿AaORA蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：6所示。

第二方面，本發明還涉及編碼青蒿AaORA蛋白的核酸序列。

優選地，所述核酸序列的堿基序列為：

如(a)SEQ?ID?NO：5中第1～1101位所示，

或者是(b)SEQ?ID?NO：5序列中第1～1101位所示的核苷酸中一個或多個密碼子被編碼相同氨基酸的簡并密碼子取代后產生的序列。

第三方面，本發明還涉及一種植物干擾表達載體，包含第二方面所述的核酸序列。

第四方面，本發明還涉及一種根癌農桿菌菌株，包含第三方面所述的植物干擾表達載體。

第五方面，本發明還涉及一種轉基因青蒿植株的獲得方法，包括如下步驟：

(a)克隆第二方面所述的核酸序列；