[發明專利]肌鈣蛋白Ⅰ血清快速檢測試劑盒(膠體金法)

無效

• 申請號: 201210006460.6
• 申請日: 2012-01-10
• 公開（公告）號: CN102539787A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 宣生良
• 申請（專利權）人: 上海一滴準生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明提供了一種快速檢測心肌梗死病癥的快速檢測的肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)。?

背景技術

心肌缺血性損傷，特別是急性心肌梗塞(AMI)是威脅人類生命的主要疾病之一，臨床化學家和臨床科學家一直努力尋找和探索特異性好、靈敏度高的血清指標，心肌肌鈣蛋白I(cardiac?troponin?I，cTnI)具有高度的心肌特異性，當心肌細胞受損時，血液中的cTnI出現時間早，持續時間長，與心肌損傷程度及預后密切相關，因此，它可作為心肌損傷的一種特異性指標。?

發明內容

本發明提供了一種用于快速檢測心肌梗死病癥的肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)，具有快速檢測試，性能極其穩定，用戶使用方便、能準確快速檢測的功能。?

本發明是通過如下技術方案實現的：?

肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)，其原理為：心肌鈣蛋白I(cTnI)的分子量為22.5KD，其連同肌鈣蛋白T和肌鈣蛋白C構成結構復合物，在心臟中的細胞間鈣信號肌動蛋白-肌球蛋白相互作用的轉化過程中起著重要作用，人體中的cTnI與骨骼肌中的形式在結構上有所不同，它的氨基端上多了一個氨基酸殘基，使得cTnI成為一個特異性的標志物，在心肌梗死(AMI)發生后，cTnI便迅速釋放入血液循環中，本發明采用雙?抗夾心免疫法，當標本加入樣品槽后，通過結合墊和金抗體結合，復合物沿膜流動和抗體在檢測區域反應，如果標本中存在有可檢出濃度或更濃的標志物，就會在檢測區出現一條色帶，如果沒有就會保持無色，標本繼續移動至控制區域，出現粉紅-玫瑰紅的色帶，說明試驗正常結果有效。?

本發明同時公開了肌鈣蛋白I血清快速檢測試劑盒(膠體金法)的制備及檢測方法，其流程為：?

一、cTnI標記用單克隆抗體的預處理?

1.1??透析，純化水，24小時；?

1.2??離心去上清，4～10℃，10000轉/分鐘、5分鐘；?

1.3??BCA法則濃度(物料平衡)；?

1.4??PH的調節，0.1mol/LK2CO3量的確定；?

1.5??最佳標記量的確定；?

1.6??分裝(5000人份量/支)、-20度凍存；?

二、試劑的配制?

2.1??1％的檸檬酸三鈉的配制；?

2.2??1％的氯金酸的配制；?

2.3??0.01％的氯金酸的配制；?

2.4??0.1ml/L?K2CO3的配制；?

2.5??10％的氯化鈉的配制；?

2.6??1％的疊氮鈉的配制；?

2.7??10％的BSA的配制；?

2.8??1mol/l?PBS的配制；?

2.9??0.05mol/l?PBS的配制；?

2.10??膠體金復溶液的的配制；?

三、膠體金的制備?

3.1??量取0.01％的HAuCL4溶液；?

3.2??加熱至沸騰，迅速加入1％檸檬酸三鈉溶液，攪拌均勻，100ml?0.01％的HAuCL4溶液加1.6ml?1％檸檬酸三鈉溶液；?

3.3??繼續加熱10分鐘，然后冷卻至室溫，用超純水恢復至原體積；?

3.4??0.22μm微孔濾膜過濾除菌；?

3.5??送檢、裝瓶、貼標簽；?

四、cTnI免疫金的制備和干燥?

4.1??cTnI標記抗體的稀釋，按照每生產5000人份4mm寬的cTnI試紙條需1支cTnI標記抗體計算，領取相應量的抗體，用0.05mol/l?PBS稀釋到0.5mg/ml；?

4.2??生產前小試?

a??取1ml膠體金；?

b??調PH值，0.1mol/L?K2CO3的量，混勻5min；?

c??根據生產指令加入CTnIAb1，混勻10min；?

d??加入100ul10％BSA，混勻10min；?

e??離心1000轉/min，30min，要求環境溫度4-10℃；?

f??30％復溶，浸泡聚酯膜0.8ml/條，0.6cm×30cm；?

g??溫度20-30℃，相對濕度30-35％干燥5小時；?

h??送質檢部檢驗；?

4.3??cTnI抗體標記?

1)標記小試質檢質檢合格，取膠體金，電磁攪拌，以生產1000人份5mm寬的肌鈣蛋白I膠體金試紙條約需50ml膠體金來計算；?