[發明專利]基于微小RNA的宮頸癌診斷和治療方法

無效

• 申請號: 201210005318.X
• 申請日: 2012-01-10
• 公開（公告）號: CN102660542A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 張玉祥;李晶華;郝啟;賈弘褆
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68;A61K45/00;A61K48/00;A61P35/00
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技術領域

本發明涉及用微小RNA(microRNA)進行宮頸癌的診斷和治療的方法。通過檢測微小RNA的表達，對宮頸癌進行診斷；通過給病人抑癌作用的微小RNA，或者抑制致癌微小RNA的活性，達到治療宮頸癌的目的。?

背景技術

眾所周知，高危型HPV感染是宮頸癌發病的主要原因。E6和E7是在HPV感染的早期出現的兩種主要癌蛋白，在宮頸癌組織和宮頸癌誘導的細胞系中均表達升高。盡管微小RNA的生物學功能還不十分清楚，一些研究發現微小RNA可導致各種癌癥的發生發展，而且它有可能參與細胞自然抵抗病毒感染的過程。?

微小RNA用于診斷：有些微小RNA的降低導致了靶向的致瘤基因的調控紊亂，進而加速了致瘤基因的轉化。例如，在慢性粒細胞性白血病和前列腺癌中發現miR-15a，miR-16-1的表達缺失，在3′端的UTR區Bcl-2轉錄子與miR-15a，miR-16-1結合，從而降調抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表達。同時miR-15a，miR-16-1促進白血病細胞系的凋亡。所以miR-15a，miR-16-1被認為是誘導原癌基因Bcl-2mRNA失活的腫瘤抑制劑。微小RNA與宮頸癌發病機制的關系之間的研究并不多見。我們用基因芯片的方法對1145種微小RNA在宮頸癌腫瘤組織和癌旁組織的表達進行了比較，發現了與宮頸癌的發病相關聯的微小RNA.?

我們通過研究發現宮頸癌組織，宮頸癌細胞系的微小RNA表達譜，確定一個精確的宮頸癌診斷和分類系統，也為發現新型治療靶點提供了理論依據。?

微小RNA用于癌癥的治療：一些微小RNA是癌基因，一些是抑癌基因，還有一些參與腫瘤的轉移。因此模擬天然的Pri-微小RNA和Pre-微小RNA的人工微小RNA正應用于基因的研究和治療領域。一些研究表明微小RNAs可以作為很多疾病有用的治療靶點。對于那些致癌性微小RNAs，它的潛在的治療方法包括微小RNAs沉默，反義阻抑和微小RNA修正。而對于抑癌性微小RNAs，過表達它們可能是抑制腫瘤細胞生長的最有效的策略。?

微小RNA沉默是在它的生成過程中阻止其成熟的一種方法。這可以通過干擾微小RNAs生成過程中的一些成分如Drosha等的活性來實現，寡核苷酸導入不同的pri-微小RNAs中也可能干擾發卡結構的形成。Pre-微小RNA的siRNA也可抑制微小RNA的合成，但是它的效率卻不高?；瘜W修飾的寡核苷酸反義阻抑是最常用的一種抑制微小RNA功能的方法，這些寡核苷酸叫做微小RNA“拮抗劑”，它們能夠特異性的有效沉默微小RNA的表達。這種拮抗作用是特異的、有效的和長久的，它們可用于抗癌治療中沉默癌性微小RNAs有力的工具。?

LNA(Locked?nucleic?acid)變更常常導致溶解溫度的提高并且增加了雙鏈的穩定性。LNA可以按照不同的模式合成，它的優點在于高的親和力，好的甚至可以提高錯配的識別能力，低毒性并且可以增加代謝的穩定性。它最吸引人的地方在于它在體內發揮抑制癌性微小RNAs的作用是RNAi永遠也達不到的，也就是說LNA可以作為一個最有希望的抗癌的的反義治療方法。?

微小RNA激動劑：可用模擬微小RNA結構的微小RNA模擬物(Mimics)，也可以通過表觀遺傳學的作用來提高細胞內源性抑癌性微小RNA的表達。?

近十年來，隨著微小RNAs發現和研究的快速進展，微小RNA表達譜對闡明疾病發生機制和提供新的治療策略將發揮重要作用。而且，微小RNAs的突變或異常表達以及他們所控制的通路可能將成為有用的治療靶點。因此，微小RNA是腫瘤分類、早期檢測、疾病預后、制定治療方案和治療靶點等方面的重要工具。?

發明內容

本發明主要針對臨床上宮頸癌的診斷和治療效果不佳的問題，提供了基于微小RNA的診斷、治療的解決方法。?

我們首先應用芯片技術對宮頸癌及癌周組織微小RNAs的表達情況進行了研究。我們應用的芯片中包含了miRBase數據庫中幾乎所有的微小RNAs，這就為我們發現與宮頸癌發生、發展密切相關的微小RNAs提供了重要的技術支持和保障。本實驗通過篩查用7個微小RNAs(4個上調，3個下調)將上述兩組組織準確的區分開來，并且發現了miR-886-5p(也叫VaultRNA2)在宮頸癌組織中表達最高。?

miR-886-5p、miR-610、miR-10a*、miR-30a*在宮頸癌組織中表達明顯高于癌周組織，是致癌性微小RNA；而宮頸癌組織中表達下調的包括miR-302d、miR-346、和miR-518b是抑癌性微小RNA；測定這些微小RNA可幫助宮頸癌的診斷；?