[發(fā)明專利]一種經(jīng)過密碼子優(yōu)化的脂肪酸脫氫酶基因序列及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210004963.X
• 申請日: 2012-01-10
• 公開（公告）號: CN102533807A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫曉鳳;李蘭;李秀娟;沈偉
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/85;C12N5/10;A01K67/00
• 代理公司: 青島高曉專利事務(wù)所 37104
• 代理人: 隋臻瑋

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種脂肪酸脫氫酶(以下簡稱FatI)基因序列及其應(yīng)用，尤其是涉及一種促使細胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的FatI基因序列及其應(yīng)用。?

背景技術(shù)：

在現(xiàn)有技術(shù)中，n-6系列的亞油酸和n-3系列的亞麻酸都是多不飽和脂肪酸(polyunsaturated?fatty?acids，以下簡稱PUFAs)是哺乳動物體內(nèi)的必需脂肪酸，其具有廣泛的生物學功能；他們參與細胞膜的構(gòu)建而且作為許多細胞應(yīng)答過程中的信號分子，它對人類及其他哺乳動物的正常發(fā)育起著至關(guān)重要的作用，在人體內(nèi)維持一定量的n-3PUFAs可以很好的預(yù)防心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病等；因此隨著人們對n-3PUFAs認識的增加對富含這一成分的食品需求也大大增加；但是，人類食譜中的n-3PUFAs含量又在不斷下降，取而代之的是越來越多的n-6PUFAs；而人體又不能有效將n-6PUFAs轉(zhuǎn)化為n-3PUFAs，這樣就使得n-6與n-3PUFAs的比值嚴重失調(diào)，甚至已經(jīng)危害到了人類的健康；而對于人體，無論n-3PUFAs的過低還是n-6PUFAs的過高都會帶來極為不利的影響。?

n-3FatI基因是合成n-3PUFAs的重要基因，他們利用n-6PUFAs做為底物在脂肪酸碳鏈甲基端第三個碳催化生成一個不飽和鍵，從而合成相應(yīng)的n-3PUFAs；因此，為了改善動物體內(nèi)n-3PUFAs的含量，除了攝取含有較多n-3PUFAs的食物之外，還可以利用n-3FatI基因以n-6PUFAs為底物來自身合成，進而從根本上改善動物體內(nèi)n-6與n-3PUFAs比例失調(diào)問題；通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，制備帶有n-3FatI基因的畜禽動物，可以獲得自身合成n-3PUFAs的畜禽，進而高效、低廉地生產(chǎn)出含有n-3PUFAs的蛋奶肉制品；但是由于FatI基因僅存在于真菌、植物和低等的動物如線蟲中，這些低等生物跟高等生物的密碼子偏好性不同，不利于直接表達；通過優(yōu)化線蟲密碼子，合成n-3FatI基因，并通過細胞轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定表達該基因的雙基因轉(zhuǎn)染細胞株(CHO)，為培育富含n-3多不飽和脂肪酸的動物新品種提供有效途徑等方面的研究已成為業(yè)界正在追求的技術(shù)內(nèi)容。?

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點；一個目的是提供一種促使細胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的FatI基因序列；本發(fā)明另一個目的是提供一種促使細胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的FatI基因序列的真核表達載體；本發(fā)明再一個目的是提供一種穩(wěn)定表達促使細胞內(nèi)n-6脂肪酸向n-3脂肪酸轉(zhuǎn)化的FatI基因序列的細胞株。?

為了實現(xiàn)上述第一個發(fā)明目的，本發(fā)明根據(jù)GenBank系列數(shù)據(jù)庫中的線蟲序列?(ACCESSION?NM_001028389)，采用化學合成法合成針對哺乳動物進行過密碼子優(yōu)化的FatI基因序列，并在起始密碼子ATG之前加上一段序列GTTGCGGCCGCCACC，其中包含有利于基因表達的Kozak序列，共1224bp；其完整的堿基序列如下：?

GTTGCGGCCGCCACCATGGTCGCTCACTCCAGCGAAGGACTGTCCGCTACCGCTCCAGTGACAGGAG?

GAGACGTGCTGGTCGATGCCAGAGCTAGCCTCGAGGAAAAAGAGGCCCCTCGAGATGTCAACGCCA?

ATACCAAGCAGGCTACCACAGAGGAACCACGCATCCAGCTGCCTACAGTGGACGCTTTCCGACGAGC?

TATTCCAGCTCACTGTTTTGAACGAGATCTGGTCAAGTCCATCCGCTACCTCGTGCAGGACTTCGCCG?

CTCTGACCATTCTCTATTTTGCCCTGCCAGCTTTCGAGTACTTTGGACTGTTCGGGTATCTCGTCTGGA?

ACATCTTCATGGGCGTGTTCGGATTTGCCCTGTTTGTGGTCGGACACGACTGCCTCCATGGGTCCTTCA?

GCGACAACCAGAATCTGAACGATTTCATCGGCCACATTGCCTTTTCCCCTCTCTTCAGCCCTTACTTTC?

CCTGGCAGAAATCCCACAAGCTGCACCATGCCTTCACCAGTCATATCGACAAAGATCCCGGCCATGTG?