[發明專利]在體內具有延長的半衰期和增強的紅細胞生成活性的重組人EPO?Fc融合蛋白

有效

• 申請號: 201210004888.7
• 申請日: 2007-01-25
• 公開（公告）號: CN102516399B
• 公開（公告）日: 2017-03-22
• 發明（設計）人: 王海濤;杜勇;張瑞;徐靜;劉龍斌
• 申請（專利權）人: 諾瓦根控股公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;C12P21/02;A61K38/18;A61K47/68;A61P7/06
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所11038
• 代理人: 羅菊華

本申請是申請日為2007年1月25日、申請號為200780000439.2、發明名稱為“在體內具有延長的半衰期和增強的紅細胞生成活性的重組人EPO-Fc融合蛋白”的發明專利申請的分案申請。?

相關申請?

本申請涉及并要求2006年1月27日提交的美國專利申請號11/340,661的權益，所述申請在此以其全文引用作為參考。?

技術領域

本申請涉及人促紅細胞生成素融合蛋白。?

背景?

人促紅細胞生成素(EPO)(造血生長因子家族的成員)主要在成人腎臟和胎兒肝臟中作為對于由于減少的血氧可獲得性引起的組織缺氧的響應而合成[1]。EPO的主要功能是對骨髓中的某些紅細胞(RBC)祖細胞和前體細胞直接作用以刺激血紅蛋白的合成和成熟RBC的產生。其還控制RBC的增殖、分化和成熟。已產生了具有天然發生的EPO的氨基酸序列的重組EPO，并且被批準用于治療與腎功能衰竭、癌癥和其他病理狀態相關的貧血癥[2]。除了其紅細胞生成特性外，近來的研究報導[3]表明，EPO還對非骨髓細胞例如神經元起作用，這暗示EPO在中樞神經系統(CNS)和其他器官/系統中的其他可能的生理/病理功?能。因為已在許多不同的器官中發現EPO受體，因此EPO可具有多種生物學效應，例如用作抗凋亡劑。?

人EPO是分子量為30.4千道爾頓的糖蛋白。糖類占其總質量的大約39％。EPO基因位于染色體7q11-22上，并且橫跨具有5個外顯子和4個內含子的5.4kb區域[4]。EPO的前體由193個氨基酸組成。通過翻譯后修飾而進行的前導序列和最后的氨基酸Arg的切割產生了具有165個氨基酸的成熟EPO。糖基化(在Asn24、Asn38、Asn83處的3個N聯位點和在Ser126處的一個O聯位點)在EPO的生物合成、三級結構和體內生物學活性中起著至關重要的作用[5]。EPO通過給合至促紅細胞生成素受體(分子量為72-78千道爾頓的糖基化且磷酸化的跨膜多肽)來發揮功能。該結合觸發所述受體的同源二聚化，這導致幾個信號轉導途徑的激活：JAK2/STAT5系統、G-蛋白、鈣通道和激酶。對于獲得最佳受體激活需要兩個分子的EPO蛋白同時結合一個受體分子[6]。?

作為第一個被批準用于人類治療的造血生長因子，重組人EPO(rHuEPO)已被用于治療由慢性腎衰竭、癌癥(主要是化療相關的貧血)、自身免疫疾病、AIDS、手術、骨髓移植和骨髓增生異常綜合征等引起的貧血癥。有趣地，近年來的研究已觀察到，rHuEPO具有非血液系統功能，并顯示用作用于腦缺血、腦外傷、炎性疾病和神經變性疾病的神經保護性藥物的潛能。?

目前，商購可得三種類型的rHuEPO或rHuEPO類似物，即rHuEPO?α、rHuEPO?β和darbepoetin?α[8]。這三種重組蛋白結合相同的促紅細胞生成素受體，但在結構、糖基化程度、受體結合親和力和體內代謝方面不同。自20世紀80年代開始引入rHuEPO-α以來，臨床醫生很快就認識到所述藥物的頻繁給藥/注射要求是個很大的缺點。靜脈內和皮下施用的rHuEPO?α和rHuEPO?β的平均體內半衰期分別只有8.5和17小時[9，10]。因此患者需要每天1次、每周2次或每周3次的注射方案，這對患者和衛生保健提供者(health?care?provider)都產生了負擔。因此，對開發具有更長的體內半衰期和/?或增強的紅細胞生成活性的重組EPO類似物存在長久的需要。?