[發(fā)明專利]培育抗病水稻的方法及其專用載體和啟動子

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210004213.2
• 申請日: 2012-01-09
• 公開（公告）號: CN103194484A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方榮祥;賈燕濤;陳曉英;郭萍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/113;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種培育抗病轉(zhuǎn)基因植物的方法，為將microRNA393的編碼基因及驅(qū)動其表達(dá)的誘導(dǎo)型啟動子導(dǎo)入目的植物，獲得轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物的抗病性高于所述目的植物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述誘導(dǎo)型啟動子為如下1)或2)：

1)由單順式調(diào)控元件和CaMV35S啟動子組成；

2)由雙順式調(diào)控元件和CaMV35S啟動子組成；

所述microRNA393的核苷酸序列為序列表中的序列3；

所述單順式調(diào)控元件的核苷酸序列為序列1的自5’末端第1-66位核苷酸；

所述雙順式調(diào)控元件的核苷酸序列為序列2的自5’末端第1-114位核苷酸；

所述CaMV35S啟動子的核苷酸序列為序列1的自5’末端第67-178位核苷酸或序列表中序列2自5’末端第115-226位核苷酸；

所述microRNA393的編碼基因的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第179-316位核苷酸或序列表中的序列2自5’末端第227-364位核苷酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述microRNA393的編碼基因及驅(qū)動其表達(dá)的誘導(dǎo)型啟動子通過植物表達(dá)載體導(dǎo)入所述目的植物；

所述植物表達(dá)載體為如下a)或b)：

a)為將序列表中的序列1插入1300-DAS的中，得到表達(dá)microRNA393的載體；

b)為將序列表中的序列2插入1300-DAS的中，得到表達(dá)microRNA393的載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

所述目的植物為雙子葉植物或者單子葉植物，所述單子葉植物具體為水稻。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述轉(zhuǎn)基因植物的抗病性高于所述目的植物是在引發(fā)所述病的病原菌誘導(dǎo)下產(chǎn)生的；

所述病具體為水稻白葉枯病，所述水稻白葉枯病的病原菌具體為水稻白葉枯病菌(Xanthomonas?oryzae?pv.oryzae)。

6.一種重組載體，為如下a)或b)：

a)為將序列表中的序列1插入1300-DAS的中，得到表達(dá)microRNA393的載體；

b)為將序列表中的序列2插入1300-DAS的中，得到表達(dá)microRNA393的載體。

7.一種DNA分子A，為如下1)-4)中的任一一種：

1)序列表的序列1自5’末端第1-66位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表的序列2自5’末端第1-114位核苷酸所示的DNA分子；

3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)所述DNA序列雜交且具有同樣功能的DNA分子；

4)與1)或2)中所述DNA序列具有90％以上同源性，且具有同樣功能的DNA分子。

8.一種DNA分子B，為如下1)-4)中的任一一種：

1)序列表的序列1自5’末端第1-178位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表的序列2自5’末端第1-226位核苷酸所示的DNA分子；

3)在嚴(yán)格條件下與1)或2)所述DNA序列雜交且具有啟動子功能的DNA分子；

4)與1)或2)中所述DNA序列具有90％以上同源性，且具有啟動子功能的DNA分子。

9.權(quán)利要求7所述的DNA分子A或權(quán)利要求8所述的DNA分子B在啟動目的基因在植物中表達(dá)的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于：

所述目的基因為microRNA393或GUS；

所述microRNA393的編碼基因的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第179-316位核苷酸或序列表中的序列2自5’末端第227-364位核苷酸。