[發明專利]分泌抗喹諾酮類藥物單抗雜交瘤細胞株及其單抗應用無效

申請號：	201210004198.1	申請日：	2012-01-09
公開（公告）號：	CN102618502A	公開（公告）日：	2012-08-01
發明（設計）人：	吳建祥	申請（專利權）人：	浙江大學
主分類號：	C12N5/20	分類號：	C12N5/20;C07K16/44;G01N33/577
代理公司：	杭州求是專利事務所有限公司 33200	代理人：	張法高
地址：	310027 浙***	國省代碼：	浙江;33
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摘要：
搜索關鍵詞：	分泌喹諾酮類藥物雜交瘤細胞株及其應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種分泌抗喹諾酮類藥物單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其單抗的應用。?

背景技術

氟喹諾酮類藥物(Fluoroquinolones，FQs)是一類人工合成的廣譜、高效的抗菌藥物。作為獸藥和飼料添加劑而大量應用于動物,導致其殘留在動物可食性產品中。這類殘留物可直接對人體造成危害：引起軟骨毒性、關節疼痛和腫脹、皮膚過敏反應、白細胞和血小板減少、嗜酸細胞增多、溶血、肝腎損傷等。更嚴重的是低濃度的殘留藥物可能會對FQs類藥物敏感的致病菌產生耐藥性,從而間接威脅人類健康。為此許多國家對喹喏酮類抗生素制定了嚴格的限量標準，我國該類抗生素的最高殘留限量：達氟沙星在?牛、羊、家禽肌肉中為200μg/kg、奶中為30μg/kg，二氟沙星在牛、羊、豬肌肉中為400μg/kg、家禽中為300μg/kg，恩諾沙星在牛、羊、豬、家禽肌肉中均為100μg/kg。?

目前采用的檢測手段主要有微生物抑制分析法、熒光分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜（GC）、薄層色譜和氣質聯用，液相色譜方法及質譜聯用方法等。目前主要用GC或HPLC進行測定。這些方法雖然有較高的靈敏度，但需昂貴的實驗儀器，操作復雜、費時費錢、不能高通量檢測，故難以在基層普及應用。而用抗體為基礎開發的免疫學檢測方法及其試劑盒和試紙條能有效克服這些不足。?

目前國內外沒有檢測喹諾酮類藥物殘留的免疫試劑盒及試紙條，本發明專利應用競爭抑制ELISA原理，以喹諾酮類藥物單克隆抗體為核心建立檢測喹諾酮類藥物殘留的競爭ELISA方法，并組裝成有自主知識產權、廉價、靈敏的喹諾酮類藥物殘留檢測試劑盒，應用免疫膠體金的原理，以膠體金標記環丙沙星特異性單克隆抗體為核心研制喹諾酮類藥物殘留快速檢測的高靈敏度的免疫試紙條。發明專利的單抗及其免疫學檢測試劑盒和試紙條完全滿足中國、歐盟、日本等地區對喹諾酮類藥物殘留的檢測要求。喹諾酮殘留的免疫學檢測方法、免疫學試劑盒及免疫試紙條的國產化對保障我國食品安全及食品的出口創匯具有重要意義，可產生巨大的經濟效益和社會效益。?

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種分泌抗喹諾酮類藥物單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其單抗應用。?

分泌抗喹諾酮類藥物單克隆抗體的雜交瘤細胞株，保藏號為CGMCC?No.?5608，它能分泌抗喹諾酮類藥物單克隆抗體；?

雜交瘤細胞株分泌抗喹諾酮類藥物單克隆抗體腹水間接ELISA效價達10^-7以上，抗體類型及亞類為IgG1、kappa鏈，該單克隆抗體能與喹諾酮類藥物環丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、達氟沙星、諾氟沙星、依諾沙星、麻保沙星、沙拉沙星和雙氟沙星有特異性免疫反應。

抗喹諾酮類藥物單克隆抗體在食品中該類抗生素殘留檢測上的應用是以單克隆抗體為核心建立的各種免疫學檢測方法及其試劑盒和試紙條。?

本發明提供的雜交瘤細胞株分泌的抗喹諾酮類藥物單克隆抗體特異性強、靈敏度高，能滿足開發免疫學檢測方法及試劑盒的要求；以該發明提供的單抗為核心建立的檢測食品中喹諾酮類藥物殘留的競爭ELISA方法及免疫學試劑盒和試紙條能特異、準確、靈敏、簡單、快速、高通量地檢測食品中喹諾酮類藥物的殘留。?

附圖說明

圖1是試紙條的特異性分析，每個樣品的含量為100ppb；?

圖2是試紙條的組織樣品檢測靈敏度分析；

圖3是試紙條的蜂蜜樣品檢測靈敏度分析；

圖4是試紙條的原奶樣品檢測靈敏度分析。

具體實施方式