[發明專利]綠僵菌破壞素合成相關基因及其應用

有效

• 申請號: 201210004127.1
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN103194461A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 王成樹;王兵;盧玉珍;張四維
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N15/53;C12N15/60;C12N15/80;C12P21/04;C12N1/14;C12N1/15;C12R1/645
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種對宿主細胞進行改造的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)測定所述宿主細胞中屬于破壞素合成基因簇的各相關基因的表達和/或活性；

(b)根據測定結果，向所述宿主細胞中導入破壞素合成基因簇的相關基因，從而提高/恢復所述宿主細胞產生破壞素的能力，

其中，所述的基因簇的相關基因包括一種或多種以下基因：dtxS1基因、dtxS2基因、dtxS3基因、和dtxS4基因。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的宿主細胞是綠僵菌。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，當所述基因簇的dtxS4基因失活或活性下降時，還包括步驟：向培養體系中添加β-丙氨酸，以促進破壞素的形成。

4.一種提高羅伯特綠僵菌產生破壞素的能力的方法，其特征在于，包括步驟：

向所述的羅伯特綠僵菌中導入破壞素合成基因簇的相關基因，從而提高所述羅伯特綠僵菌產生破壞素的能力，其中，所述的基因簇的相關基因包括一種或多種以下基因：dtxS1基因、dtxS2基因、dtxS3基因、和dtxS4基因。

5.一種制備破壞素方法，其特征在于，包括步驟：

(i)在適合培養的條件并且在添加β-丙氨酸的情況下，培養產生破壞素的宿主細胞，從而產生破壞素；和

(ii)分離或純化出所述的破壞素。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的宿主細胞是導入外源破壞素合成相關基因的羅伯特綠僵菌，其中所述的基因包括一種或多種以下基因：dtxS?1基因、dtxS2基因、dtxS3基因、和dtxS4基因。

7.一種選自破壞素合成基因簇的相關基因被缺失的羅伯特綠僵菌，其特征在于，所述的基因簇的相關基因包括一種或多種以下基因：dtxS?1基因、dtxS2基因、dtxS3基因、和dtxS4基因。

8.一種產生B類破壞素的方法，其特征在于，在適合培養的條件下，培養羅伯特綠僵菌，從而產生B類破壞素，其中所述的羅伯特綠僵菌僅缺失dtxS2基因，但不缺失dtxS1基因、dtxS3基因、和dtxS4基因。

9.一種綠僵菌，其特征在于，所述的綠僵菌含有導入的、外源的選自破壞素合成基因簇的相關基因，其中所述的基因簇的相關基因包括一種或多種以下基因：dtxS1基因、dtxS2基因、dtxS3基因、和dtxS4基因。

10.一種產生破壞素的方法，其特征在于，在適合培養的條件下，培養權利要求9所述的綠僵菌，從而產生破壞素。