[發明專利]Th1細胞因子免疫調節多肽及其應用

有效

• 申請號: 201210004099.3
• 申請日: 2012-01-09
• 公開（公告）號: CN102516366A
• 公開（公告）日: 2012-06-27
• 發明（設計）人: 康巧珍;李黎;劉鑫;汲振余;翟文杰;李國棟;高艷鋒;祁元明
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;A61K38/10;A61P11/06;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

技術領域

本發明涉及生物化學中的多肽技術，尤其是涉及一種來源于天然TLR2激動劑HP-NAP的Th1細胞因子免疫調節多肽，本發明還涉及該多肽在開發Th1細胞因子免疫調節功能相關藥物中的應用。

背景技術

人體免疫系統是機體防止病原體感染、清除腫瘤細胞和維持自身健康的重要防御體系，而CD4⁺T輔助性淋巴細胞是執行這一功能的重要環節。1986年Mosmann等在研究小鼠CD4⁺Th時發現了兩種不同類型的細胞因子產生克隆；Th1細胞主要分泌IL-2、IFN-γ等細胞因子；而Th2細胞主要分泌IL-4、IL-10等細胞因子。Th1細胞因子可以增強殺傷性細胞的細胞毒作用，介導免疫應答，與機體抗腫瘤抗病毒有關；Th2細胞因子促進抗體產生，增強體液免疫，與移植物耐受、抑制自身免疫疾病相關。

HP-NAP能上調中性白細胞及單核細胞表面β2整聯素的表達，促進中性白細胞及單核細胞與血管內皮細胞的黏附及穿過內皮細胞向感染部位轉移聚集。HP-NAP一旦從菌體中釋放出來，還可以穿過胃上皮細胞到達黏膜下層并激活巨噬細胞，巨噬細胞釋放的IL-6進一步趨化和激活中性白細胞及單核細胞。2010年，Andrea?Cappon等研究證實HP-NAP可以通過促進機體釋放一些內源性因子（IL-1β等）延長單核細胞的壽命，并且可以通過單核細胞依賴的方式延長中性粒細胞的壽命。2006年Amedeo等報道HP-NAP是一種TLR2（Toll-like?receptor?2）激動劑，能夠誘導人中性粒細胞和單核細胞產生IL-12和IL-23等細胞因子，使宿主抗原特異性CD4+T細胞由Th2向Th1免疫反應轉變。因此HP-NAP可能成為逆轉Th1/Th2漂移，增強Th1反應的免疫調節效應分子。

發明內容

本發明的目的在于提供一種來源于天然TLR2激動劑HP-NAP的Th1細胞因子免疫調節多肽，本發明另一目的在于提供該多肽在開發Th1細胞因子免疫調節功能相關藥物中的應用。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：

本發明所述的Th1細胞因子免疫調節多肽為16肽，其氨基酸序列為：

Glu-Lys-Glu-Phe-Lys-Glu-Leu-Ser-Asn-Thr-Ala-Glu-Lys-Glu-Gly-Asp。

????本發明的Th1細胞因子免疫調節多肽在制備Th1細胞因子免疫調節劑中的應用。

所述免疫調節劑為惡性腫瘤、哮喘等多肽類免疫調節劑。

本發明的優點在于采用免疫信息學手段，預測天然TLR2激動劑HP-NAP最小功能結構域，采用標準的Fmoc方案進行合成，經HPLC/MS鑒定后，用體外細胞模型驗證其對Th1細胞因子免疫調節功能。鑒定出的Th1細胞因子免疫調節多肽序列未見文獻與專利報道，為基于Th1細胞因子調節為機理的免疫調節藥物研發提供了制備與篩選技術。

附圖說明

圖1為本發明多肽的質譜分析圖；

圖2為RT-PCR鑒定本發明多肽napP102刺激PBMCs后IFN-γ表達結果。

圖3為RT-PCR鑒定本發明多肽napP102刺激PBMCs后IL-4表達結果。

圖4為本發明多肽napP102與MAGE-A3共同作用后的殺傷效果。

具體實施方式

本發明所述的Th1細胞因子免疫調節多肽為16肽，記為napP102，依據天然TLR2激動劑HP-NAP的第?102–117位的氨基酸序列進行Fmoc固相合成，HPLC分離純化,MS進行鑒定，其氨基酸序列為：

Glu-Lys-Glu-Phe-Lys-Glu-Leu-Ser-Asn-Thr-Ala-Glu-Lys-Glu-Gly-Asp；分子量為1853.958。

本發明的Th1細胞因子免疫調節多肽在制備Th1細胞因子免疫調節劑（如惡性腫瘤、哮喘等多肽類免疫調節劑）中的應用。

本發明主要采用免疫信息學手段，運用SYFPEITHI、IEDB、NetMHC2.2數據庫對HP-NAP的功能結構域進行預測分析，設計HP-NAP多肽序列。Kolaskar和Tongaonkar方法進行評價，篩選獲得多肽序列采用標準的Fmoc方案進行合成，經HPLC純化后，質譜鑒定。肽質譜鑒定圖見圖1。