[發明專利]UPLC-TQD聯用技術同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法

有效

• 申請號: 201210003856.5
• 申請日: 2012-01-09
• 公開（公告）號: CN102539573A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發明（設計）人: 董宇;壽旦;吳人杰;沈立鋒;張春
• 申請（專利權）人: 浙江省中醫藥研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及一種屬于藥物領域，尤其涉及一種同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的檢測方法。?

背景技術

萬古霉素是由一種鏈霉菌產生的、結構復雜的糖肽類抗生素，其分子式為C₆₆H₇₄C_lN₉O₂₄。主要用于葡萄球菌（包括耐青霉素和耐新青霉素株）、難辨梭狀芽胞桿菌等所致的系統感染和腸道感染，如心內膜炎、敗血癥、偽膜性腸炎等。萬古霉素可抑制細菌細胞壁的合成，對金黃色葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌等作用強，對難辨校狀芽孢桿菌、炭疽桿菌、白喉桿菌等作用也良好。與其他抗生素無交叉耐藥性，極少耐藥菌株。?

妥布霉素是一種氨基糖苷類抗生素，分子式：C₁₈H₃₇N₅O₉。妥布霉素能夠聯結在30S和50S的聯結位置，阻礙70S復合物的形成，使mRNA不能翻譯成蛋白質，導致細胞死亡。主要對革蘭陰性菌，如綠膿桿菌、大腸桿菌、克雷白桿菌、腸桿菌屬、變形桿菌、枸櫞酸桿菌有效。臨床主要用于敏感細菌引起的嚴重感染，如革蘭陰性菌特別是綠膿桿菌、大腸桿菌及肺炎桿菌等引起的燒傷感染、敗血癥、呼吸系統感染、泌尿系統感染、膽囊膽道感染及軟組織嚴重感染等。?

萬古霉素可能發生以下不良反應，大多由于過量或快速滴注引起，并明顯與產品純度不夠有關。?1．過敏反應與“紅頸綜合征”：本品過敏反應發生率約為5%，主要表現為皮疹、發熱、寒戰及過敏樣反應。靜脈滴注過量或速度過快時可能發生“紅頸綜合征”，表現為紅斑，面頸部甚至胸部潮紅，藥物熱，低血壓，甚至發生休克樣反應。原因可能與組織胺大量釋放有關。?2．腎損害：過量用藥或腎功能不全時可能發生嚴重腎損害，表現為血尿、尿量過多或減少，甚至發生尿毒癥。?3．耳毒性：耳鳴，聽力減退，甚至聽力喪失引起不可逆耳聾。耳毒性可在早期產品純度存在問題時報道較多，現已少見。耳毒性可因合用其它有耳、腎毒性藥物而加重。?4．其它不良反應：如靜脈炎；肌內注射時局部疼痛，組織壞死；口服給藥治療偽膜性腸炎時可發生食欲減退，惡心嘔吐等消化道反應。?

妥布霉素常見的不良反應為眼局部的毒副作用與過敏反應，如眼瞼發癢與紅腫、結膜紅斑，發生率低于3%；局部應用其他氨基糖甙類抗生素也會出現這些不良反應。尚無應用妥布霉素出現其他不良反應的臨床報道。但是如果將眼用妥布霉素眼膏與氨基糖甙類抗生素全身聯合用藥，就應注意監測血清中總的藥物濃度。?

創傷性骨髓炎通常由開放性骨折的術后感染，其次為閉合骨折切開復位或其他骨關節術后出現感染所致。因其病情復雜、病程漫長，并發、后遺癥多，臨床治療極為棘手，對病人的生活質量產生嚴重后果。?

目前顯微外科皮瓣植入合并抗生素應用是骨髓炎治療的主要手段，皮瓣植入與常規手術比具有創傷小、愈合快，并發后遺癥減少等優點，載藥載體一次性給藥大大地降低了抗生素用量，在創傷性骨髓炎的治療中有很好的推廣應用價值。?

目前萬古霉素含量測定的主要方法有分光光度法，高效液相法，固相萃取高效液相法，高效液相-質譜聯用法，超高液相質譜聯用技術等。妥布霉素的含量測定方法主要有濁度法，光度法，酸性染料比色法，高效液相蒸發光散射法（HPLC-ELSD），高效液相柱前衍生化法，柱后衍生化高效液相色譜法，離子交換-脈沖積分安倍法，電噴霧離子阱質譜法，高效液相質譜聯用法等。?

因此，對聯合應用萬古霉素及妥布霉素的骨髓炎患者聯合應用萬古霉素及妥布霉素的病，建立同時測定引流組織液樣本中的萬古霉素及妥布霉素含量的方法，能夠為藥物濃度檢測提供方法，達到提高藥物使用效率，降低毒副反應的目的。同時測定組織引流液中萬古霉素和妥布霉素含量的方法未見文獻報道及專利公開。?

發明內容

本發明的目的是建立一種同時測定組織引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的檢測方法，為臨床藥物濃度監測提供方案。?

為了實現上述目的，本發明建立了一種應用超高液相色譜-三重四級桿質譜聯用技術（UPLC-TQD），同時測定引流液中萬古霉素與妥布霉素含量的方法，該方法包括以下的步驟：?

1）對照品的配制

精密稱取萬古霉素、妥布霉素對照品，分別置于容量瓶中，加入純水溶解，配成所需質量濃度的對照品溶液，備用；

2）內標溶液的配制

精密稱取阿替洛爾對照品，置于容量瓶中，加入純水溶解，配成所需質量濃度的內標溶液，備用；

3）樣品溶液制備