[發明專利]榛子葉片和花芽總RNA提取方法

無效

• 申請號: 201210003007.X
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102424825A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 孟曉慶;侯智霞;蘇淑釵;張蘭
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.從植物組織中提取總RNA的方法，包括如下步驟：

1)將植物組織與聚乙烯吡咯烷酮和維生素C混合后，再加入液氮研磨成粉末；所述植物組織、所述聚乙烯吡咯烷酮和所述維生素C的配比為0.2g∶0.01g∶0.01g；

2)將步驟1)得到的粉末加入到55-65℃的權利要求6所述提取液中，55-65℃保溫10min，得到樣品混合液；

3)對步驟2)得到的樣品混合液進行RNA的抽提和RNA的沉淀，得到總RNA；所述抽提為用氯仿/異戊醇進行的抽提；所述氯仿/異戊醇是由氯仿與異戊醇按照24∶1的體積比混合得到的混合物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述氯仿/異戊醇在抽提體系中體積百分含量為50％。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟3)中所述RNA的沉淀包括用LiCl對所述RNA進行沉淀的步驟；所述LiCl在沉淀體系中的終濃度為2M。

4.根據權利要求1或3所述的方法，其特征在于：步驟3)中所述RNA的沉淀還包括用無水乙醇對所述RNA進行沉淀的步驟。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述RNA的抽提和所述RNA的沉淀包括如下步驟：

a)向所述樣品混合液中加入等體積的所述氯仿/異戊醇，混勻，于4℃12000r/min離心10min，回收上清液；

b)向步驟a)得到的上清液中加入等體積的所述氯仿/異戊醇，混勻，于4℃，12000r/min離心10min，回收上清液；

c)向步驟b)得到的上清液中加入LiCl，使其終濃度為2M，混勻后于4℃放置過夜，于4℃12000r/min離心30min，得到RNA沉淀；

d)將步驟c)所得的RNA沉淀用75％乙醇清洗，得到總RNA的粗提物；

e)將步驟d)得到的總RNA的粗提物用SSTE緩沖液溶解，加入等體積的所述氯仿/異戊醇，混勻，于4℃，12000r/min離心10min，回收上清液；

f)向步驟e)得到的上清液中加入2倍體積預冷的無水乙醇，混勻，于-20℃放置2h，于4℃，12000r/min離心30min，得到RNA沉淀；

g)將步驟f)得到的RNA沉淀用75％乙醇洗兩次，再用無水乙醇洗一次，自然干燥，溶于100μl?DEPC水，得到所述總RNA。

6.從植物組織中提取總RNA的提取液，其特征在于：所述提取液的溶劑為水，溶質為十六烷基三甲基溴化銨、Tris-Cl、乙二胺四乙酸、三鹽酸亞精胺、聚乙烯吡咯烷酮、氯化鈉、β-巰基乙醇；所述十六烷基三甲基溴化銨在所述提取液中的含量為每100ml所述提取液中含有3g所述十六烷基三甲基溴化銨，所述Tris-Cl的終濃度為100mM，所述乙二胺四乙酸的終濃度為25mM，所述三鹽酸亞精胺在所述提取液中的含量為每100ml所述提取液中含有0.05g所述三鹽酸亞精胺，所述聚乙烯吡咯烷酮在所述提取液中的含量為每100ml所述提取液中含有3g所述聚乙烯吡咯烷酮，所述氯化鈉的終濃度為2M，所述β-巰基乙醇的終濃度為體積百分含量5％。

7.根據權利要求1-5中任一所述的方法，或權利要求6所述提取液，其特征在于：所述植物組織為榛子組織。

8.根據權利要求7所述方法或所述提取液，其特征在于：所述植物組織為榛子的幼葉、雄花芽或成熟葉片。