[發明專利]一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法有效
| 申請號： | 201210002911.9 | 申請日： | 2012-01-06 |
| 公開（公告）號： | CN102533707A | 公開（公告）日： | 2012-07-04 |
| 發明（設計）人： | 洪楓;宮搏陽;楊雪霞 | 申請（專利權）人： | 東華大學 |
| 主分類號： | C12N9/88 | 分類號： | C12N9/88;C12R1/645 |
| 代理公司： | 上海泰能知識產權代理事務所 31233 | 代理人： | 黃志達;謝文凱 |
| 地址： | 201620 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 菊芋 碳源 培養 彩絨革蓋菌 誘導 草酸 脫羧酶 方法 | ||
1.一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，包括：
(1)將菊芋在105℃汽蒸15-30min，然后按照1∶1-1∶10的質量比加水，勻漿得到菊芋漿；在30-120℃下浸提0.5-3h，過濾，離心，得到菊芋汁；
(2)將上述菊芋汁稀釋至7-100g/L的總糖量，補加氮源和無機鹽獲得發酵培養基，調節pH值至4.0-5.0，滅菌后備用；
(3)以3-15vol％的接種量將彩絨革蓋菌的菌絲體種子液接入發酵培養基，在10-30℃和100-250rpm條件下培養2-6天；
(4)待菌絲球形成時，加入終濃度為1-100mM的草酸誘導產生草酸脫羧酶，培養0.5-6天后獲取菌絲體；
(5)將上述菌絲體經破碎或冷凍后破碎，然后用0.2M、pH?3.7的醋酸緩沖液提取菌絲碎片，去除殘渣，即得草酸脫羧酶粗酶液。
2.根據權利要求1所述的一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在于：所述步驟(2)中的發酵培養基中組分為：總糖為7-100g的菊芋汁，3.0g蛋白胨，1.0g?KH2PO4，0.2g?Na2HPO4·12H2O，0.5g?MgSO4·7H2O以及微量元素1ml，以水定容至1L。
3.根據權利要求1所述的一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的菌絲體種子液的培養基組分為：7-50g葡萄糖，3.0g蛋白胨，1.0g?KH2PO4，0.2g?Na2HPO4·12H2O，0.5g?MgSO4·7H2O以及微量元素1ml，以水定容至1L，。
4.根據權利要求2或3所述的一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在于：所述微量元素的組分為：FeSO4·7H2O?10g，MnSO4·H2O?1.0g，ZnSO4·7H2O?1.0g，CuSO4·5H2O?2.0g，CaCl2·2H2O?13g，用水定容至1L。
5.根據權利要求1所述的一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的草酸加入方式為間歇式、分批補料式或連續式。
6.根據權利要求1所述的一種菊芋碳源培養彩絨革蓋菌誘導草酸脫羧酶的方法，其特征在于：所述步驟(5)中的破碎方式為研磨破碎、珠磨破碎、均質機破碎或超聲破碎。
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