[發(fā)明專利]基于多重放大系統(tǒng)的檢測玉米赤霉烯酮的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210002342.8
• 申請日: 2012-01-06
• 公開（公告）號: CN102608324A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 嚴(yán)亞賢;王元凱;孫建和
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64
• 代理公司: 上海漢聲知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種基于多重放大系統(tǒng)的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一，將ZEN半抗原與OVA偶聯(lián)，得到偶聯(lián)物ZEN-OVA，再與biotin偶聯(lián)，得到偶聯(lián)物OVA-ZEN-biotin；

步驟二，將抗ZEN單克隆抗體與免疫磁珠結(jié)合，得到抗體-磁珠結(jié)合物；

步驟三，將所述抗體-磁珠結(jié)合物加入EP管中，用洗滌液洗滌，對待側(cè)樣品進行萃取，將待側(cè)樣品的萃取液稀釋后加入上述管中，震蕩；

步驟四，去除上清液，用洗滌液洗滌，再加入所述OVA-ZEN-biotin，震蕩；

步驟五，去除上清液，用洗滌液洗滌，再加入SA-HRP，震蕩；

步驟六，去除上清液，用洗滌液洗滌，加入發(fā)光底物，震蕩，測定發(fā)光值；

步驟七，根據(jù)已知不同濃度ZEN與抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體加入后得到的發(fā)光值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)待測樣品的發(fā)光值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品中的ZEN濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟一中，所述ZEN半抗原與所述OVA的偶聯(lián)通過活潑酯法完成。

3.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟一中，所述偶聯(lián)物ZEN-OVA與所述biotin的偶聯(lián)通過活潑酯法完成。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟三中，所述洗滌液為pH為7.4的0.01M磷酸鹽緩沖液。

5.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟三中，所述萃取液的稀釋倍數(shù)為5倍。

6.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟三中，所述萃取的方法為：取樣品，按照重量體積比1∶10的比例加入70％甲醇-PBS溶液，劇烈震蕩15min，靜置30min，將上清液通過快速定性濾紙過濾，即得萃取液。

7.如權(quán)利要求6所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，所述稀釋液為pH?8.2的0.1M磷酸緩沖液，所述磷酸緩沖液含有體積比為0.01％的Tween-20。

8.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟三中，所述震蕩步驟為室溫震蕩30分鐘。

9.如權(quán)利要求1所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟六中，所述震蕩步驟為室溫震蕩1分鐘。

10.如權(quán)利要求1至9任一項所述的檢測玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，在所述步驟七中，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法為：以加入ZEN濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以加入不同濃度ZEN所得到的不同發(fā)光值除以不加入ZEN所得到的發(fā)光值為縱坐標(biāo)，通過MicrosoftExcel軟件，做出散點圖并添加趨勢線公式和R²。