[發明專利]SAA4基因的用途

無效

• 申請號: 201210002286.8
• 申請日: 2012-01-05
• 公開（公告）號: CN103194530A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 黃健;劉星
• 申請（專利權）人: 上海生物芯片有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 上海序倫律師事務所 31276
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種SAA4基因的用途。

背景技術

SAA4基因(Serum?amyloid?A-4，血清淀粉樣蛋白A4基因，NM_006512)，位于11號染色體，是SAA家族中的成員之一。SAA是由同一簇基因編碼的一組多形性蛋白，它主要由肝細胞合成。SAA與CRP相似，也是一個急性期反應蛋白。結構分析表明，SAA是由104個氨基酸組成的多肽，在其天然狀態時的分子量大約12～14KD。人類SAA蛋白是一類多態性蛋白，由幾個相關的蛋白家族(SAA1～SAA4)組成。SAA1和SAA2基因基本相同，有7個Aa不同，它們編碼急性期SAA。SAA3是一個假基因，與其它的基因存在本質上的不同。SAA4在急性期反應中變化不大，是一個在動態平衡中與高密度脂蛋白膽固醇一起出現的異性物，SAA4與高密度脂蛋白密切相關。SAA4的生理功能不清楚，它在血清中的濃度與其他幾類主要的載脂蛋白不相關。

目前尚沒有關于SAA4基因作為肝癌診斷標志物的報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種SAA4基因的用途，SAA4基因可作為診斷肝癌的分子標志物。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現：

在本發明的一個方面，提供了一種SAA4基因的用途，用于制備診斷肝癌的產品。

優選的，所述診斷肝癌的產品包括：用半定量RT-PCR、基因芯片檢測、或免疫檢測診斷肝癌的產品。

所述用半定量RT-PCR診斷肝癌的產品至少包括一對特異擴增SAA4基因的引物。

所述用基因芯片檢測診斷肝癌的產品包括：與SAA4基因的核酸序列雜交的探針。

所述用免疫檢測診斷肝癌的產品包括：與SAA4蛋白特異性結合的抗體。

在本發明的另一方面，還提供了一種用于診斷肝癌的試劑盒，所述試劑盒包含特異性針對SAA4基因的引物或探針，或包含特異性結合SAA4蛋白的抗體。

利用本發明的試劑盒，可以檢測病人SAA4基因的表達情況，從而診斷病人是否患有肝癌。

在本發明中，術語“引物”是指一種寡核苷酸，可以是天然的也可以是合成的，它可以作為在一定條件下誘發DNA合成的起始點，在合適條件下誘發合成與核酸鏈互補的引物擴增產物，即在四種不同的三磷酸脫氧核糖核苷及一種聚合試劑(即DNA聚合酶或逆轉錄酶)存在下，在一種合適的緩沖液中并在合適的溫度下進行擴增反應。優選的引物是單股寡脫氧核糖核苷酸。引物的合適長度取決于該引物的設計用途，但一般在15～25個核苷酸之間。

在本發明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都可以。

在本發明中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對SAA4蛋白特異的抗體。例如，將提純的人SAA4基因產物或它的抗原片段或人工合成的含有與SAA4蛋白有連續5個相同的氨基酸的多肽片段注射入動物體內以產生多抗體。同樣，表達人SAA4蛋白或它的抗原片段的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本發明制備的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術制備。

經實驗證明，本發明SAA4基因在肝癌組織中的表達明顯低于癌旁組織，因此SAA4基因可作為診斷肝癌的特異標志基因，使肝癌診斷更加準確、快速。

附圖說明

下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明。

圖1是本發明實施例1的SAA4基因在人肝癌組織和癌旁組織中差異表達的半定量RT-PCR結果圖。

具體實施方式

下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規條件，如《精編分子生物學實驗指南》(F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學軍，舒躍龍的譯.北京：科學出版社，2004)中所述的方法進行。

實施例1用半定量RT-PCR方法檢測肝癌樣本中SAA4基因的表達變化

半定量反轉錄-聚合酶鏈反應(SqRT-PCR)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量RNA測定方法，通過mRNA反轉錄成cDNA，再進行PCR擴增，并測定PCR產物的數量，可以推測樣品中特異mRNA的相對數量。以半定量RT-PCR為基礎建立起來的mRNA含量測定技術，較含內標化的RT-PCR定量測定的mRNA的方法更為簡便可行。