[發明專利]烏蘇里蝮蛇毒FLE基因、其編碼蛋白及其真核表達產物的制備方法有效
| 申請號： | 201210002004.4 | 申請日： | 2012-01-05 |
| 公開（公告）號： | CN102559721A | 公開（公告）日： | 2012-07-11 |
| 發明（設計）人： | 劉玉芬;甄鑫;滿朝來;劉鵬;陳輝;趙文閣 | 申請（專利權）人： | 哈爾濱師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/57 | 分類號： | C12N15/57;C12N9/68;C12N15/85 |
| 代理公司： | 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109 | 代理人： | 韓末洙 |
| 地址： | 150080 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 烏蘇 蝮蛇 fle 基因 編碼 蛋白 及其 表達 產物 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.烏蘇里蝮蛇毒FLE基因，其特征在于烏蘇里蝮蛇毒FLE基因是下述核苷酸序列之一：
1)序列表中SEQ?ID?NO：1的DNA序列；
2)編碼序列表中SEQ?ID?NO：2的DNA序列。
2.權利要求1所述烏蘇里蝮蛇毒FLE基因的編碼蛋白，其特征在于烏蘇里蝮蛇毒FLE基因的編碼蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。
3.權利要求1所述烏蘇里蝮蛇毒FLE基因真核表達產物的制備方法，其特征在于烏蘇里蝮蛇毒FLE基因真核表達產物的制備方法，按以下步驟進行：
一、構建烏蘇里蝮蛇毒FLE基因的真核表達載體ppFASTBACHTa-FLE重組質粒；二、ppFASTBACHTa-FLE重組質粒的提取及純化；三、重組質粒注射小鼠：取20μg純化的ppFASTBACHTa-FLE重組質粒，用生理鹽水稀釋到小鼠體重的1/10，小鼠經尾靜脈注射稀釋的ppFASTBACHTa-FLE重組質粒，在5s內注射完畢，8h后，將小鼠經頸椎脫臼處死，取出肝臟組織，放入生理鹽水中；四、真核表達產物的制備：采用pH為7.2的磷酸鹽緩沖液清洗小鼠肝臟組織3～5次，然后按照200mg組織/ml的比例向肝臟組織中加入單去污劑裂解液，勻漿，然后于4℃、12000r/min離心10min，取上清液，采用親和層析法進行蛋白純化，即完成烏蘇里蝮蛇毒FLE基因真核表達產物的制備。
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