[發明專利]通過雙溶劑法提取蛋白質

無效

• 申請號: 201180069940.0
• 申請日: 2011-11-03
• 公開（公告）號: CN103748104A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 艾尼科特·凱萊
• 申請（專利權）人: 赫里開發公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 上海天翔知識產權代理有限公司 31224
• 代理人: 劉粉寶

1.一種從完整藻類細胞分離蛋白質的方法，其包括：

提供包含完整藻類細胞的濕藻類生物質，所述完整藻類細胞包含水、藻類蛋白質和極性脂質；

通過去除胞外水而使所述濕藻類生物質脫水以將所述濕藻類生物質的固體含量增加至5%至50%之間，從而產生部分脫水的藻類生物質；

將所述部分脫水的濕藻類生物質與兩親性溶劑組和疏水性溶劑組混合以產生包含較重相和較輕相的提取混合物，其中所述較重相包含水、兩親性溶劑組、部分脫水的濕藻類生物質和藻類蛋白質，且所述較輕相包含疏水性溶劑組和極性脂質；

將所述提取混合物的較重相與所述提取混合物的較輕相分離；

將所述部分脫水的濕海藻生物質從所述提取混合物的較重相分離以產生包含蛋白質、水和兩親性溶劑組的蛋白質混合物；以及

將所述蛋白質從所述蛋白質混合物中分離以產生蛋白質級分。

2.根據權利要求1所述的方法，其中脫水是通過離心、過濾、沉降或漂浮分級分離進行。

3.根據權利要求1所述的方法，其中在加入疏水性溶劑組之前添加一定量的兩親性溶劑組以將提取混合物的極性指數調節至約6.5至6.7。

4.根據權利要求3所述的方法，其中在加入所述兩親性溶劑組之后添加一定量的疏水性溶劑組以將提取混合物的極性指數調節至約5.7-5.9。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述兩親性溶劑組為丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇、丁酮、二甲醚和丙醛、2-丙醇、乙腈、叔丁醇、1-丙醇、水、重水(D₂O)、乙二醇、甘油或其組合。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述疏水性溶劑組為丙烷、丁烷、戊烷、丁烯、丙烯、石腦油、烷烴、己烷、戊烷、庚烷、辛烷、酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、酮、甲基乙基酮、甲基異丁基酮、芳烴、甲苯、苯、環己烷、四氫呋喃、鹵代烷烴、氯仿、三氯乙烯、醚、二乙醚、柴油、噴氣燃料、汽油及其混合物。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述較重相與所述較輕相通過潷析、膜過濾或離心分離。

8.根據權利要求1所述的方法，其中通過潷析、膜過濾或離心將所述濕藻類生物質從藻類生物質與兩親性溶劑組、蛋白質和水的混合物中分離。

9.根據權利要求1所述的方法，其中通過蒸發或蒸餾將所述兩親性溶劑組和水從所述蛋白質混合物中去除。

10.根據權利要求1所述的方法，其進一步包括回收所述兩親性溶劑組。

11.根據權利要求1所述的方法，其進一步包括濃縮且回收所述兩親性溶劑組。

12.根據權利要求1所述的方法，其中加熱所述提取混合物。

13.根據權利要求12所述的方法，其中將所述混合物用微波、水、蒸汽、或熱油或電力進行加熱。

14.根據權利要求12所述的方法，其中在大氣壓力下加熱所述提取混合物。

15.根據權利要求12所述的方法，其中在加壓反應器中加熱所述提取混合物。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述加壓反應器為分批反應器或連續反應器。

17.一種從完整藻類細胞分離蛋白質的方法，其包括：

提供包含完整藻類細胞的濕藻類生物質，所述完整藻類細胞包含水、藻類蛋白質和極性脂質；

將所述濕藻類生物質與兩親性溶劑組和疏水性溶劑組混合以產生包含較重相和較輕相的提取混合物，其中所述較重相包含水、兩親性溶劑組、濕藻類生物質和藻類蛋白質，且所述較輕相包含疏水性溶劑組和極性脂質；

將所述提取混合物的較重相與所述提取混合物的較輕相分離；

將所述濕藻類生物質從所述提取混合物的較重相分離以產生包含蛋白質、水和兩親性溶劑組的蛋白質混合物；以及

將所述蛋白質從所述蛋白質混合物中分離以產生蛋白質級分。