[發明專利]用于單細胞分選與增強IPSC重新編程的細胞培養平臺有效
| 申請號： | 201180068009.0 | 申請日： | 2011-12-19 |
| 公開（公告）號： | CN103380212B | 公開（公告）日： | 2017-04-05 |
| 發明（設計）人： | 巴萊姆·瓦拉莫河;拉姆澤伊·阿布加羅爾;彼得·弗林 | 申請（專利權）人： | 菲特治療公司 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074;C12N5/02;C12N5/0735;C12Q1/24 |
| 代理公司： | 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司11204 | 代理人： | 王達佐,洪欣 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 單細胞 分選 增強 ipsc 重新 編程 細胞培養 平臺 | ||
1.在無飼養層環境中培養多能細胞的方法，包括：
在無飼養層環境中，在包含至少一種保持細胞多能性的制劑的培養基中，培養不是小鼠胚胎干細胞的多能細胞同時在培養期間保持細胞的多能性，其中所述制劑選自：
i)TFGβ抑制劑；
ii)GSK3抑制劑；
iii)MEK抑制劑，和
iv)Rock抑制劑。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述培養基包含足夠量的所述制劑以允許至少一次細胞分裂同時保持細胞的多能性。
3.如權利要求1所述的方法，其中所述培養基包含至少兩種維持細胞多能性的制劑。
4.如權利要求1所述的方法，其中所述培養基包含至少三種維持細胞多能性的制劑。
5.如權利要求1所述的方法，其中所述維持細胞多能性的制劑包含Rock抑制劑。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述Rock抑制劑為thiazovivin或Y27632。
7.如權利要求1所述的方法，其中所述維持細胞多能性的制劑包含TFGβ抑制劑。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述TFGβ抑制劑為A-83-01或SB431542。
9.如權利要求1所述的方法，其中所述維持細胞多能性的制劑包含GSK3抑制劑。
10.如權利要求9所述的方法，其中所述GSK3抑制劑為CHIR99021或BIO。
11.如權利要求1所述的方法，其中所述維持細胞多能性的制劑包含MEK抑制劑。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述MEK抑制劑為PD98059或PD032901。
13.如權利要求1所述的方法，其中所述培養基包含TFGβ抑制劑、GSK3抑制劑、MEK抑制劑以及Rock抑制劑。
14.如權利要求1所述的方法，其中所述TFGβ抑制劑為SB431542，所述GSK3抑制劑為CHIR99021，所述MEK抑制劑為PD0325901，以及所述Rock抑制劑為thiazovivin。
15.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞多能性保持至少五次細胞分裂。
16.如權利要求1所述的方法，其中所述細胞多能性保持至少十次細胞分裂。
17.如權利要求1所述的方法，其中在缺乏生長因子與細胞因子的情況下培養所述細胞。
18.如權利要求1或17所述的方法，其中在缺乏MatrigelTM的情況下培養所述細胞。
19.如權利要求1或17所述的方法，其中所述培養基基本上無bFGF。
20.如權利要求1所述的方法，其中所述多能細胞為人胚胎干細胞或人誘導性多能干細胞。
21.培養多能細胞的方法，其包括在缺乏生長因子與細胞因子的情況下培養不是小鼠胚胎干細胞的多能細胞。
22.如權利要求21所述的方法，其中所述方法包括在培養基中培養所述多能細胞，所述培養基包含至少一種保持細胞多能性的制劑以允許至少一次細胞分裂同時保持細胞多能性，其中所述制劑選自：
i)TFGβ抑制劑；
ii)GSK3抑制劑；
iii)MEK抑制劑，和
iv)Rock抑制劑。
23.如權利要求21所述的方法，其中所述多能細胞為人胚胎干細胞或人誘導性多能干細胞。
24.如權利要求21所述的方法，其中所述培養基包含至少兩種、至少三種、或四種制劑。
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