[發明專利]檢測生物活性的方法和組合物

有效

• 申請號: 201180056542.5
• 申請日: 2011-10-28
• 公開（公告）號: CN103228795A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: S·B·羅斯科;K·J·霍爾沃森;J·D·米勒;S·J·莫勒;J·W·比約克
• 申請（專利權）人: 3M創新有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳長會

相關申請的交叉引用

本專利申請要求2010年11月24日提交的美國臨時專利申請No.61/416,858的權益，該申請以引用的方式全文并入本文中。

背景技術

用于檢測樣品中靶微生物的方法經常包括使用受靶微生物作用而形成可檢測產物的指示試劑。例如，可以通過與細胞(如致病微生物，生物學指示生物或癌細胞)相關的催化活性來檢測生物活性。

檢測到樣品中的特定生物活性可以指示樣品中的特定微生物。例如，細菌孢子包含可以在檢測樣品內活孢子的存在的方法(例如，包括快速方法)中使用的生物活性(例如，酶活性如α-吡喃葡萄糖苷酶或β-吡喃葡萄糖苷酶)對這些生物活性或其他生物活性之一的破壞可以用來驗證和/或證實消毒過程的的成效。

發明內容

本發明主要涉及檢測生物活性在樣品中的存在或不存在的組合物、制品和方法。在一些實施例中，生物活性的存在或不存在可以指示微生物的存在或不存在。本發明方法包括在樣品、可以由第一生物活性轉化成第一生物衍生物的第一指示試劑和多個能夠接收并保持來自含水液體的第一生物衍生物的粒子之間提供流體連通。有利地，第一生物衍生物可以從含水液體分配到粒子上和/或分配到粒子中，從而將第一生物衍生物濃縮至相對小的區域或體積中。將第一生物衍生物分配到粒子上和/或分配到粒子中，可以使得第一生物衍生物與它原本在含水液體中的檢測相比更容易地檢測。另外，粒子可以極大地限制第一生物衍生物在水凝膠中的擴散，從而使得可以檢測水凝膠中存在的多種單獨的生物活性、微生物或微菌落。

在一個方面，本發明提供一種檢測生物活性的方法。該方法可以包括提供可能包含第一生物活性的樣品、可由第一生物活性轉化成第一生物衍生物的第一指示試劑和多個粒子，每個粒子包含接受并保持所述第一生物衍生物的有機聚合物。第一指示試劑可以包含具有熒光團的生熒光(fluorogenic)酶底物，所述熒光團選自傘形酮、7-氨基香豆素、β-萘胺、β-萘酚、熒光素、試鹵靈、9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)、羅丹明110、任何前述熒光團的衍生物和任何前述熒光團的組合。該方法還可以包括形成含水分散體，所述含水分散體包含所述第一指示試劑和所述多個粒子；使所述樣品與所述含水分散體處于流體連通；并且檢測所述第一生物衍生物的存在或不存在，其中所述第一生物衍生物被粒子保持。

在該方法的以上實施例的任一項中，檢測生物衍生物的存在或不存在可以包括檢測發熒光(fluorescent)第一生物衍生物或有色生物衍生物。在以上實施例的任一項中，該方法還可以包括提供膠凝劑，其中形成含水分散體包括形成水凝膠，其中所述多個粒子中的至少一部分分散在所述水凝膠中。在該方法的以上實施例的任一項中，提供膠凝劑可以包括提供冷水可溶性膠凝劑。在一些實施例中，冷水可溶性膠凝劑可以選自羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、聚丙烯酰胺、刺槐豆膠、瓜耳膠、黃原膠和褐藻膠、二醇改性的多糖和淀粉接枝的聚(丙烯酸鈉-共-丙烯酰胺)。

在一些實施例中，該方法還可以包括提供可以由第二生物活性轉化成第二生物衍生物的第二指示試劑，使第二指示試劑與水凝膠處于流體連通并檢測第二生物衍生物的存在或不存在。當第二指示試劑包含生熒光酶底物時，第二指示試劑可以具有熒光團，所述熒光團選自傘形酮、7-氨基香豆素、β-萘胺、β-萘酚、熒光素、試鹵靈、9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)、羅丹明110、任何前述熒光團的衍生物和任何前述熒光團的組合。

在以上實施例的任一項中，該方法還可以包括提供可以由第二生物活性轉化成第二生物衍生物的第二指示試劑并檢測第二生物衍生物的存在或不存在。當第二指示試劑包含生熒光酶底物時，第二指示試劑可以具有熒光團，所述熒光團選自傘形酮、7-氨基香豆素、β-萘胺、β-萘酚、熒光素、試鹵靈、9H-(1，3-二氯-9，9-二甲基吖啶-2-酮)、羅丹明110、任何前述熒光團的衍生物和任何前述熒光團的組合。形成含水分散體可以包括形成包含第二指示試劑的含水分散體。

在該方法的以上實施例的任一項中，使樣品與含水分散體處于流體接觸可以包括形成包含所述樣品、第一指示試劑和所述多個粒子的含水分散體。

在該方法的以上實施例的任一項中，使樣品與含水分散體處于流體連通后，該方法還可以包括分離來自含水分散體或在其內部的所述多個粒子的一部分。在一些實施例中，分離所述部分包括通過沉降、離心、絮凝或過濾分離所述部分。