[發明專利]改善干細胞的療效的組合物和方法

有效

• 申請號: 201180056525.1
• 申請日: 2011-11-28
• 公開（公告）號: CN103298497A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: L·達席爾瓦費雷拉;D·C·多斯桑托斯佩德羅索
• 申請（專利權）人: 克瑞奧埃斯塔麥諾健康與技術股份有限公司
• 主分類號: A61L27/22
• 分類號: A61L27/22;A61L27/38;C12N5/078
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

發明的技術領域

本發明涉及仿生膠(biomimetic?gel)中的人臍帶來源的CD34⁺細胞與從CD34⁺細胞衍生的內皮細胞的共培養物的組合物，其用于損傷的治療。

背景

本發明順應對用于治療慢性損傷（特別地糖尿病患者的）的更有效方法的需要而產生。

據估計15%的糖尿病患者具有未愈的足潰瘍。近年來，已努力開發治愈慢性損傷的新型先進方法，包括使用局部生長因子或基于細胞的療法。在干細胞的情況下，治療是基于下列假定：干細胞的局部施用調節愈合反應。

最近的數據顯示健康成體干細胞/祖細胞改善糖尿病慢性損傷的愈合。已顯示外周血來源的CD34⁺細胞但非CD34^-細胞可加速糖尿病損傷的血管生成和愈合(Schatteman?GC等人,2003)。然而，成人血液來源的細胞的血管生成潛能似乎因糖尿病而減小。最近的研究試圖通過使用胎兒(Invernici?G等人,2009)或成人(Tredget?EE等人,2007)間充質干細胞來克服該問題，然而，從胎兒主動脈分離干細胞具有將來臨床應用面臨的幾個問題；從糖尿病患者分離的間充質干細胞可能因衰老和疾病而具有受損的性質。在胎兒主動脈干細胞的情況下，結果表明干細胞釋放因子(例如VEGF和IL-8)，所述因子刺激血管生成和激活Wnt信號轉導，促進糖尿病缺血性潰瘍的愈合。

人臍帶血(UCB)可以是用于愈合糖尿病患者的慢性損傷之愈合的健康的內皮祖細胞的潛在來源。可非侵襲性地獲得此類細胞，可將所述細胞貯存超過15年而不丟失生物學性質，并且它們具有低免疫原性，這使得它們成為用于同種異體移植的吸引人的候選者。最近已在兩個人非糖尿病患者中報導了損傷愈合的改善，所述非糖尿病患者局部接受纖維蛋白凝膠中的UCB來源的CD34⁺細胞(Dejana?AM等人,2004)。盡管存在該潛能，但人臍帶血干細胞未曾用于糖尿病患者的損傷治愈，糖尿病患者的愈合過程受到削弱或甚至不存在的。在該情況下，干細胞可能需要生物活性劑的刺激和細胞間相互作用來獲得存活和治療效果。這是本發明的焦點。

在本專利中，在鏈脲霉素誘導的糖尿病小鼠中測試CD34⁺細胞或CD34⁺細胞與CD34⁺-衍生的EC的組合的療效，所述小鼠先前已用于研究基于細胞的療法對損傷愈合的療效(Invernici?G等人,2009,Wu?Y,2008)。重要地，沒有研究已證明UCB來源的CD34⁺細胞在糖尿病損傷的情況下的再生潛能。此處，我們顯示相較于利用單獨的凝膠或PBS覆蓋的損傷，纖維蛋白凝膠中的CD34⁺細胞與CD34⁺-衍生的EC一起的移植（而單獨的CD34⁺細胞則不）增強了損傷愈合。相當大一部分的細胞(超過90%)在3天的時間中死亡。這與其它顯示干細胞在損傷位置的急劇減少的研究一致(Invernici?G等人,2009)]。即使這樣，在我們的研究中在10天的時間中觀察到治療益處，這可能歸因于由兩種細胞分泌的因子，所述因子增加血管新生并且減弱炎癥反應。我們的結果顯示當共培養兩種細胞時，僅分泌細胞因子IL-10和IL-17。IL-10是單核細胞/巨噬細胞功能的強效免疫抑制劑，抑制促炎細胞因子的產生。我們的許多結果還顯示TNF-α（一種促炎細胞因子）的水平在利用CD34⁺細胞與EC處理的或僅用包裹在纖維蛋白凝膠中的CD34⁺細胞處理的損傷中更低。

關于現有技術，在再生醫學領域中有若干使用本發明的一些組分，但提供明顯不同的方法和組合物的專利。例如，標題為“Using?of?scaffold?comprising?fibrin?for?delivery?of?stem?cells”的專利申請(US2010/0028311A1)部分地提供了用于治療有此需要的受試者的缺血的組合物和方法。所述方法在于施用包含干細胞(CD34⁺細胞)的纖維蛋白支架或纖維蛋白凝塊。然而，該發明沒有描述改善CD34⁺細胞的存活性、血管分化和療效的方法。

概述