[發(fā)明專利]多能干細(xì)胞心肌細(xì)胞分化促進(jìn)劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201180051572.7
• 申請日: 2011-08-24
• 公開（公告）號: CN103209968A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 中辻憲夫;上杉志成;山田耕平;南一成;尾辻智美
• 申請（專利權(quán)）人: 國立大學(xué)法人京都大學(xué)
• 主分類號: C07D277/82
• 分類號: C07D277/82;A61K31/428;A61K31/496;A61K31/5377;A61K35/34;A61L27/00;A61P9/00;A61P43/00;C12N5/077
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 紀(jì)曉峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于促進(jìn)多能干細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞的組合物，和用于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞的方法，以及用于從多能干細(xì)胞制備心肌細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化的技術(shù)對于再生醫(yī)學(xué)的實(shí)現(xiàn)和體外藥物篩選研究的建立或藥物安全性評價是關(guān)鍵。尤其，對于用于心臟病的再生醫(yī)學(xué)和藥物評價很重要，原因在于目前在日本心臟病是第二位的死因。存在多種藥物，其誘發(fā)嚴(yán)重的副作用，包括心臟停搏和心律不齊，導(dǎo)致不斷增加的對提供同質(zhì)心肌細(xì)胞(其可用于心臟毒性研究)的需要。到目前為止，已有報道，通過將人ES細(xì)胞和小鼠飼養(yǎng)細(xì)胞，END2細(xì)胞共培養(yǎng)來誘導(dǎo)人ES細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)1)。然而，此方法的分化效率不令人滿意并且它難以獲得純的人心肌細(xì)胞，因?yàn)樗玫娜诵募〖?xì)胞通常被小鼠END2細(xì)胞污染。還有報道，通過由ES細(xì)胞制備胚胎體并向胚胎體中加入若干細(xì)胞因子(成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP4)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)、Dickkopf-1(DKK1)、活化素A)來誘導(dǎo)心肌細(xì)胞分化(非專利文獻(xiàn)2和3)。然而，此方法需要大量的細(xì)胞因子并且成本太高，同時其分化效率不足。

引用列表

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1：

Mummery，C.，等，Differentiation?of?human?embryonic?stem?cells?to?cardiomyocytes：role?of?coculture?with?visceral?endoderm-like?cells(人胚胎干細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞：與內(nèi)臟內(nèi)胚層樣細(xì)胞共培養(yǎng)的作用).Circulation(循環(huán)).107(21)，2733-40(2003)。

非專利文獻(xiàn)2：

Yang，L.，等，Human?cardiovascular?progenitor?cells?develop?from?a?KDR+embryonic-stem-cell-derived?population(人心血管祖細(xì)胞發(fā)育自KDR+胚胎干細(xì)胞源的種群).Nature(自然).453(7194)，524-8(2008)。

非專利文獻(xiàn)3：

Leschik，J.，等，Cardiac?commitment?of?primate?embryonic?stem?cells(靈長類動物胚胎干細(xì)胞的心臟定向).Nat?Protoc.3(9)，1381-7(2008)。

上述文獻(xiàn)通過引用結(jié)合于此。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

在再生醫(yī)學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域需要以低成本高效率制備同質(zhì)心肌細(xì)胞的方法。

解決問題的方案

本發(fā)明的發(fā)明人考察了9600種庫化合物的促進(jìn)猴ES細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞的作用，并且發(fā)現(xiàn)低分子量化合物N11474具有促進(jìn)心肌細(xì)胞分化的作用。此外，發(fā)現(xiàn)通過N11474及其類似化合物的合成開發(fā)獲得的類似物KY02111具有促進(jìn)心肌細(xì)胞分化的作用。因而，本發(fā)明已經(jīng)得以實(shí)現(xiàn)。

本發(fā)明提供一種用于促進(jìn)多能干細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞的組合物，所述組合物包含由式(I)表示的化合物或其鹽：

[式1]

其中，

R₁至R₅各自獨(dú)立地是氫原子；鹵素原子；羥基；具有1至5個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基；未取代的或被鹵素原子取代的具有1至5個碳原子的直鏈或支鏈烷基；或基團(tuán)-NR₁₂R₁₃，其中R₁₂和R₁₃獨(dú)立地是氫原子，氧原子，或是未取代的或被鹵素原子取代的具有1至5個碳原子的直鏈或支鏈烷基；其中R₁至R₅中的兩個相鄰基團(tuán)可以結(jié)合在一起以形成-O-CH₂-O-或-O-(CH₂)₂-O-，