[發(fā)明專利]裂殖酵母屬酵母的轉(zhuǎn)化體及其制造方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201180051372.1
• 申請(qǐng)日: 2011-11-01
• 公開（公告）號(hào): CN103180442A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 東田英毅;岡田和士
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 旭硝子株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C12N1/19;C12P19/14
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 侯莉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及裂殖酵母屬酵母的轉(zhuǎn)化體及其制造方法，具體涉及可生產(chǎn)β-葡糖苷酶的裂殖酵母屬酵母的轉(zhuǎn)化體及其制造方法。

背景技術(shù)

為了由木材或稻草、稻殼、雜草等纖維素類生物質(zhì)生產(chǎn)作為發(fā)酵原料的糖并進(jìn)而生產(chǎn)生物乙醇等生物質(zhì)燃料，必須降解作為植物細(xì)胞壁的主要構(gòu)成成分的纖維素。纖維素的降解有濃硫酸糖化法或稀硫酸糖化法等酸糖化法、利用酶的酶糖化法等方法，在近年來生物技術(shù)迅猛發(fā)展的背景下，進(jìn)行了大量酶糖化法的研究開發(fā)。纖維素的酶糖化利用被總稱為纖維素酶的一類酶。首先，具有隨機(jī)切斷纖維素鏈的活性的內(nèi)切葡聚糖酶(EG)將纖維素的非晶體區(qū)域降解，使葡萄糖末端露出。露出的葡萄糖末端被纖維二糖水解酶(CBH)降解，纖維二糖游離。接著，β-葡糖苷酶(BGL)將游離的纖維二糖降解，從而葡萄糖游離。

由于可生產(chǎn)用于降解結(jié)晶纖維素進(jìn)行糖化的各種纖維素酶或半纖維素酶并可將這些酶大量分泌至細(xì)胞外，纖維素的酶糖化廣泛采用曲霉屬和木霉屬等絲狀菌。

此外，也進(jìn)行了通過異種株表達(dá)這些絲狀菌的纖維素酶的嘗試，非專利文獻(xiàn)1中揭示了通過編碼作為絲狀菌之一的棘孢曲霉(Aspergillus?aculeatus)的β-葡糖苷酶Ⅰ(BGLⅠ)的基因?qū)ψ鳛槌鲅拷湍傅尼劸平湍?Saccharomyces?cerevisiae)進(jìn)行轉(zhuǎn)化，使所得的轉(zhuǎn)化體表達(dá)了這些酶。

現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)

非專利文獻(xiàn)1:G.Tanaka等,Biosci.Biotechnol.Biochem.,62(8),1615-1618,1998.

發(fā)明的概要

發(fā)明所要解決的技術(shù)問題

然而，酶糖化法的情況下，存在下述問題：如果葡萄糖隨著基于酶的纖維素的水解反應(yīng)進(jìn)行而在反應(yīng)體系內(nèi)積聚，積聚的葡萄糖會(huì)抑制β-葡糖苷酶，纖維二糖積聚，進(jìn)而積聚的纖維二糖抑制內(nèi)切葡聚糖酶和纖維二糖水解酶，結(jié)果纖維素?zé)o法完全降解。因此，希望β-葡糖苷酶高功能化。

另一方面，與曲霉屬和木霉屬相比，裂殖酵母屬酵母的基因分析更深入，具有確立了各種有用的變異株和基因?qū)胗幂d體、適合于蛋白質(zhì)的工業(yè)化大量生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)，但裂殖酵母屬酵母不具有固有的β-葡糖苷酶基因，無法對(duì)纖維二糖進(jìn)行同化。

非專利文獻(xiàn)1中，完全沒有提到使出芽酵母生產(chǎn)的β-葡糖苷酶的葡萄糖抑制。

于是，本發(fā)明的目的在于提供可生產(chǎn)β-葡糖苷酶的裂殖酵母屬酵母的轉(zhuǎn)化體及其制造方法。

解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案

本發(fā)明人為了解決上述課題而進(jìn)行了認(rèn)真研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過采用染色體中具有來源于絲狀菌的編碼β-葡糖苷酶的結(jié)構(gòu)基因序列等或具有這些序列作為染色體外基因的裂殖酵母屬酵母的轉(zhuǎn)化體，可解決上述課題，從而完成了本發(fā)明。